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肝素的抗凝血作用实验目的 2、学习测定凝血时间测定的方法 3、了解阿司匹林在体内抗凝血的双向作用及其机制。 【实验原理】 新鲜血液离体后，凝血因子被异物（如玻璃）表面所激活，启动了内源性凝血过程。由于血液中存在内源性凝血所需的所有凝血因子、钙和血小板，血液发生凝固。血液凝固所需时间为凝血时间。 药物通过影响凝血过程，可延长凝血时间，产生抗凝血作用。由于作用环节和作用机制的不同，抗凝血药可分别在体内或体外发挥作用。具有体内抗凝血作用的药物可用于治疗血栓栓塞性疾病、体外循环等，具有体外抗凝血作用的药物主要用于血液样本的抗凝。凝血时间采用毛细玻管法。 肝素：在体内和体外均有强大的抗凝作用。静脉注射后，抗凝作用立即发生。增强抗凝血酶Ⅲ的活性。激活肝素辅助因子Ⅱ，抑制凝血酶的活性。促进纤溶系统激活。 疏血通注射液（有效成分为水蛭素和蚓激酶样物质）：水蛭素与凝血酶按 1 : 1的比例非共价结合形成一种稳定的复合物 , 抑制了凝血酶的活性, 从而阻止了纤维蛋白原凝固及凝血酶对血小板的作用 , 达到抗凝的目的。 枸橼酸钠：为体外抗凝剂。本品的枸橼酸钠根离子与血中钙离子生成难解离的可溶性络合物枸橼酸钙，此络合物易溶于水但不易解离，凝血过程受到抑制，从而阻止血液凝固。 阿司匹林：血栓素A2 ( TXA2）是血小板释放ADP 及聚集的诱导剂，小剂量的阿司匹林能抑制前列腺素合成酶，能够减少血小板中TXA2 的生成，而呈现抗血小板聚集的抗血栓形成的效能。但在大剂量时，阿司匹林能抑制血管壁中前列腺素（PGI2 ）的合成，PGI2 是TXA2的生理性拮抗剂，PGI2 合成减少，TXA2 的功能相应增强，诱发血小板的聚集。试验证明，血小板中前列腺素合成酶对阿司匹林的敏感性远较血管中的前列腺素合成酶为高，因此用小剂量的阿司匹林（成人一日50 毫克）就可预防血栓的形成，而大剂量却无此功能。 【实验0.2%肝素钠生理盐水（300U/ml）、3.8%枸橼酸钠溶液、、0.2g/ml疏血通注射液。0.8mg/ml（0.08%）和6mg/ml（0.6%）阿司匹林溶液（普通阿司匹林片配得） 。 【实验步骤和观察项目】 实验步骤 （1）取小鼠35只称重编号，随机分成五组，每组6只。 （2）体外抗凝血作用： 取干燥小瓶6个编号，分别加入生理盐水、0.2%肝素钠生理盐水（300U/ml） 、 3.8%枸橼酸钠溶液、 0.2g/ml疏血通注射液以及0.025ml/g(0.08%)、0.1875ml/g( 0.6%)阿司匹林溶液各1滴。 采用摘眼球法取小鼠眼内眦新鲜血液立即加入上述小瓶内各3滴，轻轻摇匀，分别以毛细玻管吸入血液至将满，平置于木框上。 2min后每隔30s折断各支毛细玻管0.5cm，折断处有凝血丝出现即表示有凝血，记下凝血时间。5min后如未凝血，改为隔5min折断一次，30min任未凝血则记为凝血时间大于30min。结果记录于表格中。 （2）体内抗凝血作用： 取小鼠6只编号标记。 鼠1腹腔注射等量生理盐水。 鼠2腹腔注射0.2%肝素钠生理盐水0.5ml（300U/ml）。 鼠3腹腔注射3.8%枸橼酸钠溶液0.5ml。 鼠4腹腔注射0.2g/ml疏血通注射液0.5ml。 鼠5用 0.025ml/g ，0.8mg/ml(0.08%)阿司匹林溶液0.5ml灌胃。鼠6用0.1875ml/g ，6mg/ml ( 0.6%)阿司匹林溶液0.5ml灌胃。 给药后20min后用分别以毛细玻管在小鼠眼内眦采血并灌至将满，平置于木框上。按上法测定凝血时间。结果记录于表格中 表 肝素、1）灌胃操作中，避免误入气管致动物窒息死亡。 （2）体外抗凝血实验中，加入血液后应立即混匀并计时，测凝血时间。 （3）体内抗凝血实验中，应统一于给药后20min取血（凝血时间测定从给药后20min计时） （4）折断毛细玻管用力宜轻柔，两端应慢慢拉开，以免判断错误。 【思考题】 （1）试从肝素、肝素、