超顺磁氧化铁纳米微粒促进大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞.PDF

·652 · doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2017.05.14 J South Med Univ, 2017, 37(5): 652-658 基础研究 超超顺磁氧化铁纳米微粒促进大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞顺磁氧化铁纳米微粒促进大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞 分分化化 1 1 1 1 1 3 1，2 蒋 方 ，肖继杰 ，陆苑婷 ，李 葳 ，段宇雯 ，盛宗海 ，李绍林 1 2 南方医科大学第三附属医院影像科，广东 广州 510630 ；中山大学第五附属医院放射科，广东 珠海 3 519000 ；中国科学院深圳先进技术研究院，广东 深圳 518055 摘要：目的探讨超顺磁氧化铁（SPIO）纳米微粒对SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成软骨分化的影响并探讨背后可能的机 制。方法 体外培养SD 大鼠BMSCs ，Caspase-8 比色测定工具包（CCK8法）检测SPIO（1和5 μg/mL）对BMSCs 细胞毒性；SPIO （1和5 μg/mL）与成软骨培养基混合培养9 d ，普鲁士蓝染色和自发荧光检测验证SPIO 与BMSCs 结合情况；荧光定量聚合酶链 反应检测成软骨相关因子mRNA 的表达量，如：二型胶原α2、聚集蛋白聚糖、基质金属蛋白酶13；体外行阿利新蓝染色及二型胶 原α2 免疫荧光染色检测BMSCs 成软骨量；Western blot 检测软骨标记蛋白二型胶原α2 ，聚集蛋白聚糖和基质金属蛋白酶13表 达量以及Ihh/PTHrP 信号通路蛋白Ihh、PTHrP 表达量明确机制。结果 体外CCK8法检测提示SPIO（1和5 μg/mL）对BMSCs 细 胞活性无影响，差异无统计学意义（P0.05）；荧光定量聚合酶链反应检测二型胶原α2 和聚集蛋白聚糖的mRNA 表达提示，和对 照组（单纯加入溶剂）相比，1 μg/mL SPIO 的mRNA 量明显增加，5 μg/mL SPIO 的mRNA 量大于1 μg/mL SPIO ，基质金属蛋白酶 13 的mRNA 表达出现浓度依赖抑制，和对照组相比1 μg/mL SPIO 表达减少，5 μg/mL SPIO 的mRNA 量小于1 μg/mL SPIO ；体 外阿利新蓝染色和二型胶原α2 免疫荧光染色提示阳性细胞随着SPIO浓度增加而增加，且均大于对照组（P0.05）；蛋白免疫印 迹提示二型胶原α2 和聚集蛋白聚糖蛋白表达随SPIO 升高而升高，且均大于对照组，但基质金属蛋白酶13表达量随SPIO 升高 而降低，且均小于对照组，Ihh 和PTHrP 蛋白表达量随SPIO浓度增加而升高，且均大于对照组（P0.05）。SPIO促进Ihh/PTHrP 信号通路，除CCK8法检测结果外均出现浓度依赖性。结论 超顺磁氧化铁纳米微粒在体外实验促进BMSCs 向软骨细胞分化， 并上调Ihh/PTHrP 信号通路，为治疗软骨退变相关疾病提供可能的治疗手段。 关键词：超顺磁氧化铁；骨髓间充质干细胞；成软骨分化 Effect of superparamagnetic iron oxide on differentiation of rat bone marrow stem cells into chondrocytes in vitro 1 1 1 1 1 3 1, 2 JIANG Fang , XIAO Jijie , LU Yuanting , LI Wei , DUAN Yuwen , SHENG Zonghai , LI Shaolin 1Department of Imaging, Third Affiliated Hospital of Southern Medical University, Guangzhou 510630, China; 2Department of Radiology, Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen U