农杆菌介导facbl1基因转化红颜草莓的研究.pdfVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第１２期 — ３９— 王全智，魏　跃．农杆菌介导ＦａＣＢＬ１基因转化红颜草莓的研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１２）：３９－４２． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．１２．００９ 农杆菌介导ＦａＣＢＬ１基因转化红颜草莓的研究 王全智，魏　跃 （江苏农林职业技术学院／江苏现代园艺工程技术中心，江苏镇江２１２４００） 　　摘要：为了建立草莓品种红颜（Ｆｒａｇａｒｉａ×ａｎａｎａｓｓａＤｕｃｈ．Ｂｅｎｉｈｏｐｐｅ）的高效稳定转基因体系，以草莓红颜组培苗 的叶片作为试验材料，对影响基因的因子进行优化，获得稳定高效的转基因体系。结果表明，农杆菌菌液Ｄ ＝ ６００ｎｍ ０．４、侵染时间２０ｍｉｎ、培养３ｄ后草莓抗性芽诱导率较高。用３５０ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素（ｃａｒｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，简称Ｃｂ）作为抑菌 抗生素能够有效抑制农杆菌而不伤害草莓叶片；用２０ｍｇ／Ｌ卡那霉素（ｋａｎａｍｙｃｉｎ，简称Ｋａｎ）作为筛选抗生素能够尽可 能多的去除非抗性芽。荧光定量ＰＣＲ检测结果表明，草莓ＦａＣＢＬ１基因已经成功转入草莓基因组中。 　　关键词：农杆菌；草莓；ＦａＣＢＬ１基因；转化 　　中图分类号：Ｓ６６８．４０１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）１２－００３９－０３ 　　八倍体栽培草莓品种红颜（Ｆｒａｇａｒｉａ×ａｎａｎａｓｓａＤｕｃｈ． 试验选用草莓品种红颜组培苗，由江苏农林职业技术学 Ｂｅｎｉｈｏｐｐｅ）是由日本引入我国栽培的优良品种，该品种果实 院农学园艺系组织培养实验室保存。组培苗在 ＭＳ＋ 果形正，鲜食口感好，丰产性好，品质优良，适于设施栽培，目 ０．５ｍｇ／ＬＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上继代培养备用。 前已经成为我国栽培面积较大的一个品种，尤其是在江、浙地 取草莓叶片剪去叶尖和叶缘，将叶片剪成３ｍｍ×３ｍｍ的叶 区，栽培面积较大，占草莓总栽培面积的５０％以上。但是由 块备用。 于该品种耐储性差，货架期短，而且该品种抗病性差，育苗过 １．２　菌株、载体和基因 程极易感染炭疽病，成苗率低，设施栽培过程中容易感染白粉 本试 验所 用农 杆 菌 （Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）是 病和灰霉病。因此，亟待对该品种进行改良，而传统的育种方 ＧＶ３１０１，由江苏现代园艺工程技术 中心实验室保存。 法周期长，见效慢。近年来，由于转基因技术在作物品种改良 ＧＶ３１０１含有植物表达载体ｐＫ７ＷＧ２Ｄ，该载体上含有的目的 中的广泛应用，也有多项关于草莓基因改良的报道。因此，用 基因是ＦａＣＢＬ１基因，并带有 －葡糖苷酸酶基因（ＧＵＳ）和卡 β 那霉素（Ｋａｎ）抗性的新霉素磷酸转移酶基因（ｎｐｔ ）。 分子育种的方法改良草莓基因在未来草莓产业的发展中是一 Ⅱ 条必经之路，能够为草莓分子育种开辟一条新途径，对红颜草 １．３　培养基及培养条件 莓的推广种植和提高红颜草莓生产的经济效益有重要的 共培养培养基（Ｇ）：ＭＳ＋４．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ １ 意义。 ＩＢＡ；筛选培养基（Ｇ）：ＭＳ＋４．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ