应用鼓泡塔式反应器生产藏红花素的研究 - 中国医药生物技术.PDF

中国医药生物技术 2011 年 4 月第 6 卷第 2 期 Chin Med Biotechnol, April 2011, Vol. 6, No. 2 141 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.02.013 ·技术与方法· 应用鼓泡塔式反应器生产藏红花素的研究 陈书安，王晓东，袁晓凡，赵兵，王玉春 藏红花（Crocus sativus L. ）被誉为“植物黄金”，是一 2 结果 种名贵的妇科良药，有望成为 21 世纪最理想的抗癌药物之 2.1 通气量对藏红花细胞悬浮培养的影响 一[1-3] 。但藏红花种植条件苛刻、适宜栽培的地区有限、田 鼓泡式生物反应器结构简单、剪切力较小、操作简易、 间栽培过程易感染病毒，加之其柱头入药、产量极低，致使 不易染菌，在植物细胞培养中被较广应用。在 2.5 L 鼓泡式 其资源短缺、价格昂贵[3-4] 。通过植物细胞培养体系生产藏 生物反应器中接种鲜重为 100 g 的藏红花细胞，控制不同 红花素，是解决藏红花资源短缺的有效途径之一[3] ，其中生 的通气量，在 2 L M2B5 液体培养基中（22 ± 1 ）℃ 全时 物反应器技术是其实现产业化的关键技术之一。 暗培养 28 d 后，细胞的生物量和藏红花素的产量如图 1 为建立藏红花细胞培养体系，从诱导的 229 株藏红花 所示。 愈伤组织中筛选出一株藏红花素含量高、生长速度快的细胞 系[4-5] ；经脱毒处理，该细胞系无国内外报道的侵染藏红花 的病毒[6] ，经优化建立了其摇瓶培养体系[7-8] 。为实现藏红 花素的规模化生产，选择鼓泡塔式反应器作为研究的对象， 探求其生物反应器培养的参数。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 细胞系 藏红花球茎 1 细胞系，黄色，质地疏松， 不透明。 [9] 1.1.2 培养基 以 B5 （Gamborg，1968） 为基本培养基， 添加 1 mg/L 6-苄氨基嘌呤（6-BA ）、2 mg/L 萘乙酸（NAA ） 和 300 mg/L 水解酪蛋白，简称 M2B5 培养基。 3 通气量（m /h ） 1.1.3 仪器 UV-2802 紫外可见光检测器为尤尼柯（上 图 1 通气量对鼓泡式生物反应器中藏红花细胞生长和藏 海）仪器有限公司产品；2.5 L 鼓泡式生物反应器：反应器 红花素累积的影响 罐体高 30 cm ，直径为 12 cm 。 1.2 方法 从图 1 可见，气流量对藏红花细胞的悬浮培养影响较 1.2.1 生物量的测定方法 将藏红花细胞悬浮培养液，经 大，在一定范围内，随着通气量的增加，细胞的生物量和藏 8000 × g 离心 20 min ，取离心沉淀的细胞置于烘箱，60 ℃ 红花素的产量也在增加。当通气量为 0.015 m3/h 时，细胞 烘干至恒重，称其干重即为生物量。 生长最快，生物量达到最高，为 8.6 g/L ；藏红花素的产量 1.2.2 藏红花素含量测定方法 将藏红花细胞悬浮培养 也达到最高，为 0.44 g/L ；与生物量相对应，细胞的增长倍 液，经 8000 × g 离心 20 min ，回收上清液；将离心沉淀的