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通过薄层色谱分离和鉴定叶绿素
实验122 薄层色谱法分离鉴定叶绿素;122.2 实验原理
植物叶片中的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括叶绿素a、叶绿素b、β-胡萝卜素及叶黄素等四种。
叶绿体色素是脂溶性色素，植物叶绿体色素通常可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。在波长662 nm、644 nm测定吸光值，可根据公式计算叶绿素a和叶绿素b的含量。通过薄层色谱(TLC)对叶绿体色素提取液进一步分离，可分离叶绿素a、叶绿素b、β-胡萝卜素及去镁叶绿素，经多次制备可得少量叶绿素纯品，并进行光谱表征。;122.3 实验步骤 1. 大叶黄杨叶片预处理：;(1)提取液的粗提纯：; 硅胶G薄层板活化 ;(3) 展开：;4. 叶绿体色素的光谱表征：;122.4 注意事项
(1) 研磨叶片时要将其尽量剪碎，使叶片得到充分研磨；研磨至叶片发白为止。
(2) 层析液倒入层析缸后，盖上盖子，让其气相饱和10 min以上，否则分离效果不佳。
(3) 薄层色谱点样时，尽量使斑点小，直径不超过5 mm，若斑点颜色较浅，可反复点直至其呈深绿色。
(4) 大叶黄杨叶薄层色谱分离一般可得橙黄色β-胡萝卜素、灰色的去镁叶绿素、蓝绿色的叶绿素a及黄绿色的叶绿素b色带。;122.5 问题讨论
(1) 绿色植物叶片的主要成分是什么？提取液可能含有哪些化合物？
(2) 薄层色谱分离色素原理是什么？
(3) 试比较叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素的极性，为什么β-胡萝卜素在薄层板上移动最快？;122.6 参考答案
(1) 绿色植物叶片的主要成分是什么？提取液可能含有哪些化合物？
答：色素主要成分有脂溶性和水溶性色素，脂溶性色素主要为叶绿素与类胡萝卜素，水溶性色素主要为花色甙类，又称花青素。提取液可能含脂溶性色素。; (2) 薄层色谱分离色素原理是什么？
答：薄层色谱分离色素原理是利用不同色素在各种有机溶剂中的分配系数或在吸附剂上的吸附能力的不同，当它们通过薄层板时，这种分配或吸附过程反复多次 地进行，最后将它们一一分离开来。; (3) 试比较叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素的极性，为什么β-胡萝卜素在薄层板上移动最快？
答：极性：叶绿素b＞叶绿素a＞β-胡萝卜素；β-胡萝卜素在层析液中的溶解度大，对薄层板的吸附能力小，所以移动最快。
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