262例乙型肝炎患者YMDD变异检测及研究.docVIP

262例乙型肝炎患者YMDD变异检测及研究【关键词】 慢性乙型肝炎；实时荧光PCR；YMDD变异 拉米夫啶是常用的核苷类抗乙型肝炎病毒（HBV）药物，对HBV有明显的抑制作用，但随着拉米夫啶的广泛应用，许多文献报道已证明YMDD变异是引起拉米夫啶耐药的机制，为了解慢性乙型肝炎患者YMDD变异的存在状况，对262例慢性乙型肝炎患者进行了HBV DNA YMDD变异的检测，现报道如下： 1 材料与方法 1.1 一般材料 262例血清样本均来自中山大学附属第二医院2009年9月至2010年6月收治的慢性乙型肝炎患者，全部病例符合2000年9月西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》中慢性乙型肝炎的诊断标准。 1.2 仪器与试剂 ABI 7500荧光定量PCR仪，来自美国应用生物系统公司；乙型肝炎病毒核酸扩增（PCR）荧光定量测定及YMDD变异检测试剂盒，来自艾康生物技术（杭州）有限公司。 1.3 标本采集 用一次性注射器抽取患者静脉血1～2 ml，置于灭菌的一次性试管中（不可用肝素抗凝），3000～4000 rpm离心20 min，分离血清，－20℃保存不超过7天。 1.4 检测方法 采用乙型肝炎特异引物及特异Taqman MGB探针，并结合FQ-PCR技术，同时检测HBV载量以及YMDD变异情况。取待测血清样本、强阳性、临界阳性、阴性血清对照品各50 u