HPLC测定白头翁药材中白头翁皂苷B4含量.docVIP

HPLC测定白头翁药材中白头翁皂苷B4含量摘要 目的：建立白头翁药材白头翁皂苷B4的含量测定方法。方法：运用高效液相色谱法测定，色谱柱为Inertsil ODS-3 C18（5μm 250×4．6mm），流动相为乙腈-0．1%磷酸溶液(29:71),流速0．8mlmin-1,柱温为常温;检测波长203nm。结果：白头翁皂苷B?4在0．60～7．2μg之间线性关系良好,r=0．9 999。平均回收率为98．5%，RSD小于2．0%。结论：本法方便、准确、灵敏、重复性好，可以用于白头翁药材的质量控制。? 关键词 白头翁 白头翁皂苷B4含量测定 高效液相色谱法?? 白头翁为毛莨科植物白头翁pulsatilla chinensis（Bge．）Regel的干燥根。味苦，寒，归胃、大肠经。白头翁始载于《本经》具有清热解毒，凉血止痢之功效，可用于热毒血痢，阴痒带下，阿米巴痢等［1、2］。其主要有效成分为皂苷类成分，白头翁皂苷B4为其主要有效成分之一，其含量也较高［3］，故建立高效液相色谱法对其含量进行测定，对白头翁药材或制剂的质量标准研究具有很重要的意义。本实验在确定了测定方法后，对白头翁药材中的白头翁皂苷B4进行了含量测定。? 1 仪器与材料? Waters高效液相色谱仪（515 HPLC Pump，Waters 2 478 Dualλ紫外检测器，威马龙色谱数据工作站）；实验用乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；白头翁皂苷B?4对照品购于长沙拓康生物制品有限公司（HPLC归一法测定纯度大于98%）；白头翁药材均购于各药材公司。? 2 方法与结果? 2．1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Inertsil ODS-3 C18（5μm 250×4．6mm）;流动相为乙腈-0．1%磷酸溶液(29:71);流速0．8mlmin-1;检测波长203nm; 进样量对照品、供试品分别进样10μl、20ul；柱温为常温。在此色谱条件下，理论塔板数不小于3000，分离度大于1．5,峰形较好。对照品与样品的色谱图见附图1? 附：HPLC测定白头翁皂苷B4色谱图 ? 2．2 对照品溶液制备 取白头翁皂苷B4对照品6mg,精密称定,加流动相溶解成每1ml含白头翁皂苷B4对照品0．6 mg的溶液,作为对照品溶液。? 2．3 供试品溶液的制备 精密称取白头翁药材粉末（过3号筛）0．2g，加甲醇10 ml，密塞，超声处理30分钟（功率150W频率40KHz），放冷，滤过，取滤液1ml置蒸发皿中水浴挥干，放冷，加流动相转移至10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，?匀，过0．45μm滤膜，即得。? 2．4 线性关系考察 精密吸取白头翁皂苷B4对照品溶液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0、12．0、14．0μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以白头翁皂苷B4进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=?326 273．1 846X+7 558．5 482，r=0．9 999。结果表明白头翁皂苷B4在0．60~7．2μg与峰面积呈良好的线性关系（数据见表1）。 2．5 精密度试验 精密吸取白头翁皂苷B?4对照品溶液10μl,重复进样5次,记录峰面积,结果精密度良好，RSD为0．80%（结果见表2）。? 2．6重复性试验 精密称取5份同一批药材粉末（过3号筛）0．2g，同2．3项下方法制备供试品溶液，进样分析，计算白头翁皂苷B?4的含量，结果重复性良好，RSD为1．57% 。（结果见表3）?? 2．7 稳定性试验 精密称取白头翁药材粉末（过3号筛）0．2g, 同2．3项下方法制备供试品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分别进样20μl分析，计算白头翁皂苷B?4的含量，结果稳定性良好，RSD为1．61%（结果见表4）。? 2．8 加样回收率试验 精密称取同一批已知含量的白头翁药材粉末（过3号筛）0．1 g,共6份(分别按相当于药材含量的80%、100%、120%加入白头翁皂苷B?4对照品溶液) ，同2．3项下方法制备供试品溶液，分别进样分析，由测得量与加入量计算回收率，结果表明回收率良好（结果见表5）。 2．9 样品测定 对购买到的白头翁药材按供试品溶液制备项下方法制备样品溶液,进样分析,以外标法计算其含量(结果见表6)。? 3 讨论? 3．1 提取条件的确定 实验过程中比较了回流和超声两种常用方便的提取方法，超声提取法明显好于回流提取法（可能高温的影响）；对水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作为提取溶剂进行考察，结果甲醇好于其它溶剂。? 3．2 检测波长的选取 经用紫外分光光度法测定，白头翁皂苷B4在202±1nm处有着最强吸收