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健脾固肠丸对大鼠慢性结肠炎作用机制探析【关键词】健脾固肠丸；大鼠；慢性结肠炎；氧自由基 健脾固肠丸是我院治疗慢性结肠炎所致腹痛、腹泻的经验方，由“参苓白术散”加减化裁而成。本实验通过复制大鼠慢性结肠炎模型，观察了健脾固肠丸对模型鼠疾病活动度（DAI）、肠黏膜组织病理和氧自由基等的影响，现 报告如下。 1试验材料 1.1实验动物清洁级SD大鼠60只，体重(200±20)g，雌雄各半。由河南省实验动物中心提供，许可证号：SYXK（豫）2005－0012。 1.2试剂三硝基苯磺酸(TNBS)，购于Sigma公司； SOD、MDA测定试剂盒由南京健成生物工程研究所提供。 1.3供试药物健脾固肠丸（水丸），10 g /次，3次/d，由河南大学第一附属医院制剂室提供，1 g水丸相当于约1.09 g生药。大鼠低、中、高剂量按成人用量的5倍、10倍、20倍计算，即2.7、5.5、10.9 g/kg，将供试药物用蒸馏水配成270、550、1090 g/L的悬浊液，临用前摇匀。 补脾益肠丸（广州陈李济药厂生产），6～9 g/次，3次/d，用作阳性对照药物。大鼠取10倍成人用量即3.75 g/kg，药物用蒸馏水配成375 g/L。 2试验方法 2.1模型制作采用TNBS灌肠法[1]制作慢性结肠炎大鼠模型。 2.2给药方法与标本留取造模2周后，开始按上述剂量灌胃（ig）给药，给药体积为10 ml/kg。模型组及正常组给予等体积蒸馏水，1次/d，连续2周。末次给药24 h后，脱颈椎法处死大鼠，取下整段结肠。 2.2.1大鼠结肠黏膜组织病理形态学变化：取2cm结肠段石蜡包埋，置于片上，HE染色，观察组织学变化。 2.2.2大鼠结肠黏膜SOD、MDA的测定：取2g结肠黏膜加入2ml PBS，水浴条件下制成匀浆。匀浆器5000r/min，间隔20s，共3次。再加入16ml PBS，低速离心机，1500r/min，5min，弃沉淀。取上清液，于－80℃保存。SOD活力采用黄嘌呤氧化酶法测定。MDA含量采用TAB比色法测定。具体步骤参照试剂盒操作说明。 2.3统计学处理采用SPSS12.0统计软件，组间比较用方差分析，组内比较用t检验。 3结果 3.1各组大鼠体重和粪便性状变化评价（DAI评分） 大鼠粪便性状变化评价（DAI），见表2。 3.2各组大鼠结肠黏膜组织病理形态学变化与模型组比较，各治疗组在用药两周后，大鼠结肠黏膜充血水肿明显减轻，炎性渗出物减少，结肠断面病理切片显示黏膜趋于恢复正常，腺体生长，杯状细胞仍有轻度萎缩现象，仍有少量炎性细胞浸润。 3.3各组大鼠结肠组织中SOD活力、MDA含量比较结果表明，各组造模大鼠结肠组织中MDA含量均较正常组为高（P0.05或P0.01），其中各用药组大鼠结肠组织中MDA含量较模型组显著降低（P0.05）；与正常组比较，模型组大鼠结肠组织中SOD的活力显著降低（P0.01），各用药组SOD的活力则无显著差异（P＞0.05），与模型组比较，各用药组SOD的活力均显著升高（P0.05）。 4讨论 慢性结肠炎属中医学“肠风”、“泄泻”等范畴，主要病机是感受外邪，内伤饮食，脾胃虚弱而致湿热郁结大 肠，伤及血络致泄泻及便脓血等。现代医学治疗本病，多应用抗生素，但使用日久，易产生耐药性，同时又有导致肠道菌群失调之弊 [3]。 健脾固肠丸方中人参甘温主入脾经，擅补脾胃之气；白术甘温而性燥，即可益气补虚，又能健脾燥湿；茯苓甘淡，为利水渗湿，健脾助运之要药，参术相合，益气补脾之功著，苓术为伍，除湿运脾之效彰，三味合用，脾气充倍添化湿之功，湿浊去凸显健脾之力，共同发挥益气健脾渗湿作用，同为君药。苍术辛温苦燥，善燥脾湿，助苓术以祛湿；山药为平补脾胃之品，炒用以增健脾之力，共助人参、白术益气健脾，厚肠止泻为臣药；附子辛甘大热，益命火而暖脾土，振奋中阳以助君药之用亦为臣药。黄连苦寒，入脾胃走中焦，一则清热燥湿，以助脾运，二则防止附子辛热太过，亦为臣药。诃子、芡实、煨豆蔻、石榴皮均酸涩而性温，入脾与大肠，健脾固肠，收敛止泻为佐使药。诸药合用，补中焦之虚，温命门之火，助脾气之运，渗停聚之湿，固大肠之泻，标本兼顾则诸症自除[4]。 近年来研究表明，MDA等氧自由基在慢性结肠炎中发挥了重要的作用。MDA是促进炎症发生发展的重要因素，SOD可加速清除炎症反应所产生的对结肠粘膜有损伤的大量超氧化物离子等自由基。本实验结果表明，健脾固肠丸可明显提高慢性结肠炎大鼠结肠粘膜中SOD活力，降低MDA含量，使慢性结肠炎大鼠结肠黏膜充血水肿明显减轻，炎性渗出物减少，结肠断面病理切片显示黏膜趋于恢复正常，说明健脾固肠丸可能通过抑