免疫印迹法试验出现gp160及p24带型及HIV-1感染关系探析.docVIP

免疫印迹法试验出现gp160及p24带型及HIV-1感染关系探析实验室特异性检测是艾滋病病毒感染者（HIV）和艾滋病病人（AIDS）的重要诊断依据，其检测结果的准确性不仅影响到受检者本人还涉及到其家属及社会的稳定。目前常用的HIV感染的标准诊断仍沿用免疫学方法检测HIV抗体。近年来，随着艾滋病知识的普及，重点人群的大面积筛查，检测数量逐年增加，免疫印迹法试验（WB）出现gp160和p24双带型的样本越来越多，按照我国《全国艾滋病检测技术规范（2004）》的判定标准，应判定为HIV抗体阳性。但在实际工作中，此类对象的转归却各有不同，如何正确解释和正确判断尤为重要。为此，我们对36例ELISA检测阳性，WB为gp160和p24双带型的对象进行了随访和流行病学调查，探究各种因素对判定结果的影响。 1材料与方法 1.1标本来源 2006年上海市疾病预防控制中心艾滋病确证中心实验室接收全市艾滋病监测筛查实验室送检的HIV抗体待复检标本?1 644例，其中36例ELISA检测为阳性反应，WB出现gp160和p24条带，为本次的研究对象。 1.2试剂 1.2.1筛查试剂采用HIV1+2抗体酶联免疫吸附试验（ELISA），初筛采用法国生物梅里埃中国有限公司生产的第三代HIV1+2抗体诊断试剂盒（Vironostika?? HIV Uni-Form II Plus O），复筛选用日本Dainabot有限公司生产的免疫层析法试剂盒（Determine HIV-1/2）。上述试剂均有国家药监局注册，批批检合格，并在有效期内使用。 1.2.2确认试剂MP生物医学亚太有限公司生产的人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）型抗体免疫印迹试剂盒（HIV BLOT 2.2），该试剂有国家药监局注册，批批检合格，并在有效期内使用。 1.2.3HIV-1核酸定量测定（病毒载量VL）试剂法国生物梅里埃公司生产的NucliSense EasyQ?? HIV-1 v1.2技术平台系统，其中包括试剂：裂解液试剂盒（NucliSense?? Lysis Buffer），提纯试剂盒（NucliSense??Magnetic Extraction Reagents）和扩增检测试剂（NucliSense?? EasyQ）。该试剂经国家药监局注册，并在有效期内使用。 1.3仪器 采用美国BIO-TEK洗板机，ORGANON TEKNIKA Microwell system酶标仪Reader 230；MP生物医学亚太有限公司生产的全自动免疫印迹仪（AutoBlot System-20）；法国梅里埃公司生产的半自动核酸提取仪（NucliSens?? miniMAGTM）和 NucliSens EasyQ??核酸实时定量扩增检测系统。 1.4方法 1.4.1随访血清学检测和流行病学调查 ① 随访周期和内容：分别于1、2、4、6、8周采集新鲜血液样本进行ELISA和WB试验。如果在随访8周后，WB的条带毫无进展，调查对象自述无任何危险行为，则改为间隔3个月随访1次，随访至6个月结束。 ② 流行病学资料来源：HIV抗体复检化验单、筛查呈阳性反应时提前收集的相关信息、随访过程中相关信息、确认阳性以后流行病学调查资料。 1.4.2样品检测 ① 样品检测程序：全市艾滋病检测实验室送检的HIV抗体待复检样品，再经酶联免疫吸附试验和免疫层析法试剂检测，呈阳性反应，则进行确认试验。 ② WB试验结果判定：根据《全国艾滋病检测技术规范（2004）》的判定原则结合试剂盒说明书的要求。 ③ WB条带判定标准：WB至少有2条包膜（env）糖蛋白（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和1条核心（gag）蛋白（p24）同时出现时，判定为HIV-1抗体阳性；如出现至少2条env带（gp36和gp140/ gp105）或符合试剂盒提供的阳性判定标准时，判定HIV-2抗体阳性；无HIV抗体特异带出现，则判定为HIV抗体阴性；出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性，则判定为HIV抗体不确定。 ④ HIV-1 RNA核酸定量检测：在本次研究中，以VL值大于400 IU/mL，则判定为HIV-1感染；VL值小于最低检测限（400 IU/mL）者未感染HIV-1 的可能性较大。5例随访到的样本同时进行了HIV抗体检测和核酸定量测定。 1.4.3转归的判定原则依据随访WB结果判定HIV抗体阳性和核酸定量测定。如随访出现条带明显增加，则判定为HIV抗体阳性；如随访至6个月，条带均无增加或者条带减少或者消失，且随访对象无任何艾滋病的临床症状，则判定为HIV抗体阴性。未能随访到的对象转归根据核酸定量检测即