急性髓系白血病中Nras基因点突变检测以及信号传导通路蛋白表达.docVIP

急性髓系白血病中Nras基因点突变检测以及信号传导通路蛋白表达[摘要] 目的 研究Nras基因在急性髓系白血病(AML)中的突变以及在AML和正常对照组中RAS蛋白下游信号传导通路上AKT、ERK1/2以及其活化形式P-AKT和P-ERK1/2的表达情况。方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性法(PCR-SSCP)及直接测序法检测AML中Nras基因突变率,应用Western blot法检测AKT、ERK以及其活化形式P-AKT,P-ERK1/2的表达量。结果 48例AML中检测到2例Nras 12突变,2例Nras 61突变,突变组P-AKT、P-ERK1/2的表达水平较正常对照组明显升高(P0.05)。A、B两组与C组比较,差异有统计学意义(均P0.05)。另外A、B两组内比较,P-AKT/GAPDH、P-ERK/GAPDH表达水平分别比AKT/GAPDH、ERK/GAPDH要低,差异有统计学意义(均?P0.05)? 3 讨论? 目前认为AML多由几个基因联合致病,著名的“二次打击”认为,Ⅰ类突变导致增殖/存活优势(包括BCR-ABL,TEL-PDGFRB,FLT3和Ras等基因突变),Ⅱ类突变导致分化受阻(包括PML-RARA、RUNX1-ETO等基因突变)[4],可见Ras基因突变是导致AML发生的重要原因之一。Tayler等[5]研究表明,AML发病与Ras基因突变之间存在密切关系,约15%～?30%的AML患者有Nras和Kras基因突变,而在正常人群中Ras的自然突变几乎检测不到。Bowen等[6]在年龄小于60岁AML患者的大样本研究中发现,大约11%(126/1 106)的患者存在Nras突变。? 本研究中AML患者Nras基因总突变率比国内外报告稍低,考虑可能与PCR-SSCP检测的敏感性有关,以后可考虑采用多种方法检测以提高检测率。另外国外[7]报道Nras基因突变中主要以Nras 12/13基因位点突变为主,而本研究中Nras 61与Nras 12/13位点突变各检测到2例,Nras 12/13位点突变占总突变的比例稍低,考虑可能与检测样本量较少有关。? 另外在18例对照组中,未检测到Nras基因突变,表明AML发病与Nras基因突变间存在密切关系,因此认为Nras基因突变是导致某些AML发生的重要原因之一。? AKT和ERK1/2分别是细胞增殖途径Raf/Mek/Erk和抗凋亡途径PI3K/Akt上两个重要信号传导通路蛋白,它们在体内一系列重要生物学效应中起重要作用,一旦因为某种原因其蛋白被磷酸化,则会处于持续激活状态,导致多种恶性疾病的发生[8]。? 本实验中,在AML伴或不伴Nras基因突变组,AKT、ERK1/2、P-AKT和P-ERK1/2蛋白表达量较正常对照组均有明显增高,其中AML伴Nras基因突变组增高更明显。据此推测Nras基因突变后导致RAS蛋白构型改变,RAS蛋白持续活化,导致增殖途径Raf/Mek/Erk和抗凋亡途径PI3K/Akt持续激活,从而引起AML发生。而在AML不伴Nras基因突变组AKT、ERK1/2、P-AKT和P-ERK1/2蛋白表达量也较正常对照组有明显增高,考虑是因为AML的发生是由几个基因联合致病的,而多种原因(如C-kit基因突变,PI3K p110d的上调,PTEN的磷酸化或下调等)都可以引起Raf/Mek/Erk和PI3K/Akt途径的持续激活,导致AKT、ERK1/2、P-AKT和P-ERK1/2蛋白的高表达。? 随着BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂格列卫成功应用于CML患者,分子靶向治疗越来越成为研究热点。因为在AML患者,不管伴或不伴Nras基因突变,都有AKT、ERK1/2、P-AKT和P-ERK1/2蛋白的高表达,因此有理由相信阻断这两条通路是治疗AML很好的靶点,目前已经有一些针对这两条通路的靶向抑制剂正处于临床试验中,如PD098059、PD184352、U0126、磷脂酰肌醇类似物、perifosine和deguelin等,并且取得了一定的疗效[9-12]。? 另外,由于Ras信号通路调控的复杂性,阻断一条通路,机体往往可以通过另一条通路代偿,因此有些靶向药物单独使用有时疗效较差,多个靶向药物的联合应用,阻断多条发病信号通路成为一种必然选择。进一步了解信号传导通路,寻找更多的靶向位点将对AML治疗具有重要意义。? [参考文献]? [1]Gouqopoulou D M,Kiari S H,Erqazaki M,et al.Mutations and expression of the ras family genes in leukemias[J].Stem Cells,199