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斑秃患者外周血淋巴细胞亚群探究【摘要】 目的 对斑秃患者外周血T淋巴细胞亚群及B细胞、NK细胞进行分析。方法 应用流式细胞仪检测44例斑秃患者及40例正常对照人群的外周血淋巴细胞亚群。结果 44例斑秃患者外周血中总T、TH细胞及TH /TS比值均明显低于正常对照组(P0.05)。结论 本研究结果提示斑秃患者外周血中T淋巴细胞亚群存在着明显的细胞紊乱和细胞免疫抑制。 【关键词】 斑秃;T淋巴细胞亚群;流式细胞仪 Study of peripheral blood T lymphocyte subpopulation in patients with alopecia areata PEI Hong-li. The Seventh People’s Hospital of Shenyang , Shenyang 110003 , China 【Abstract】 Objective Analyse the results Of peripheral blood T lymphocyte subpopulation, B cell and NK cell in patients with alopecia areata. Methods The lymphocyte in peripheral blood of 44 samples patients with alopecia areata and 40 samples with normal control were detected by flow cytometry. Results The results showed that the pan T, TH and radio of TH /TS were significantly lower (P0.05).Conclusion This study showed that the prominently cellrlar immunity change and suppressed in peripheral blood T lymphocyte subpopulation with alopecia areata. 【Key words】 Alopecia areata; T lymphocyte subpopulation; Flow cytometry 斑秃为一种突然发生的局限性斑片状脱发,可发生于身体任何部位。近年来的研究显示,斑秃的发病与免疫机制相关[1]。为了探讨斑秃患者外周血中淋巴细胞的变化,找出其淋巴细胞变化的规律,笔者对2009年1月~12月期间本院皮肤科44例斑秃患者和40例正常人的外周血中淋巴细胞采用流式细胞仪进行检测,并对结果进行统计分析,现将结果报告如下。 1 资料和方法 1.1 临床资料 实验组为皮肤科门诊斑秃患者共44例,包括男21例,女23例,均具备斑秃的典型临床表现,临床确诊为斑秃。患者年龄分布在7～60岁,平均28.2岁。对照组为40例健康体检者,其中男21例,女19例,平均年龄为30.4岁。 1.2 方法 1.2.1 标本采集 抽取外周静脉血2ml,采用EDTA-K2抗凝。 1.2.2 仪器与试剂 仪器为美国BD(BectonDickinson)公司生产的FACSCalibur型流式细胞仪,采用双色组合标记抗体,对外周血中淋巴细胞亚群进行检测。荧光抗体分别为异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的鼠抗人CD?+?3的单克隆抗体和藻红素(phycoerythrin,PE)标记的鼠抗人CD?+19、CD?+?4、CD?+?8、CD?+16,CD?+56的单克隆抗体。相同荧光标记的同种型免疫球蛋白(IgG1/ IgG2)作为阴性对照。荧光抗体和溶血素均购自美国BD公司。 1.2.3 实验方法 ①分别取100 μl抗凝血标本加入5支试管中,依次加入20 μl双标记鼠抗人单克隆抗体(CD?3FITC/CD?4PE、CD?3FITC/CD19PE、CD?3FITC/CD?8PE、CD?3FITC/CD16,56PE),阴性对照加入荧光标记的同种型免疫球蛋白;②溶血:每管加入经过10倍稀释的1?FACS溶血素2 ml,室温避光放置10 min后1500 r/min离心5 min,弃上清;③每管加入2 ml的PBS缓冲液,1500 r/min 离心5m in,弃上清,然后加入0.5 mlPBS缓冲液混匀;④流式细胞仪检测,每管计数10000个细胞,记数荧光标记阳性的CD?+?3、CD?+19、CD?+?4、CD?+?8、CD?+16,?+56细胞,分别代表总T、B、TH、TS