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有机磷诱导HUVEC-12损伤实验探究【摘要】 目的 观察有机磷农药敌百虫对人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)损伤的时相特征，探讨敌百虫诱导内皮细胞损伤的作用机制。方法 将HUVEC-12与含不同浓度敌百虫的DMEM培养基孵24 h后，MTT法检测细胞的活性；以IC50浓度的敌百虫处理细胞一定时间后(0、4、6、8、12、24、48 h)，观察敌百虫诱导内皮细胞损伤的时相特征；硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)浓度。结果 敌百虫呈时间依赖性地促进内皮细胞凋亡及细胞上清液MDA产生。结论 敌百虫刺激HUVEC-12氧化应激，致细胞损伤。? 【关键词】敌百虫；人脐静脉内皮细胞；丙二醛；内皮型一氧化氮合酶 The damage on human umbilical vein endothelial cell lines induced by trichlorfon LI Rong-fei， YI Gao-zhong，GUO Peng-cheng， et al.Department of Pharmacology, Huaihua Medical College,Huaihua 418000，China ? 【Abstract】 Objective To explore the time-effect of damage in human umbilical vein endothelial cell lines induced by Trichlorfon and to analyze its mechanism.Methods HUVECs-12 were cultured in DMEM containing Trichlorfon for 24 h， the growth inhibition was measured by MTT assay.Cells were incubated in IC50 concentration Trichlorfon (400 μmol/L) for different times(0，4，6，8，12，24，48 h)) to test the time-effect of damage in human umbilical vein endothelial cells; the level of malondialde-hyde (MDA) in supernatant-conditioned media was monitored by thiobituric acid reaction (TBA).Results Trichlorfon inhibited HUVECs-12 growth in a dose-dependent manner and increased the production of MDA.Conclusion Trichlorfon can induce damage in human umbilical vein endothelial cells.? 【Key words】Trichlorfon;Human umbilical vein endothelial cells;Malondialdehyde;Endothelial nitric oxide synthase 有机磷农药主要通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)造成乙酰胆碱蓄积，从而激动毒蕈碱和烟碱能受体而产生中枢神经系统症状。然而长期接触较低剂量有机磷农药的人群如农民、从事农药作业的工人等，其AChE活性可能并不降低。我们采用有机磷农药敌百虫（Trichlorfon）与人脐静脉内皮细胞共同孵育建立细胞实验模型，观察较低剂量敌百虫对内皮细胞的损伤作用，探讨敌百虫低剂量敌百虫致血管内皮损伤的时相特征及机制。 1 材料与方法 1．1 材料 人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)由中南大学湘雅药学院提供，源于美国典型培养物保藏中心（ATCC）。Trichlorfon购于Sigma公司；DMEM购于美国Gibco公司；胎牛血清购于杭州四季青公司；MDA试剂盒购于南京建成生物工程研究所；eNOS一抗购于美国Santa Cruze公司。 1．2 细胞培养 人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12，用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中传代培养，用0．25%胰蛋白酶进行消化传代。 1．3 MTT法检测细胞活力 取对数生长期细胞，以5×10?7/L的密度接种于96孔平底培养板，随机分为正常对照组（不加干预因素）及7个Trichlorfon药物组，分别以浓度为12．5、25、50、100、200、400、