bmp-2 和地塞米松对人牙髓细胞增殖和分化的影响 - 中国修复重建 .pdf

• 738 • Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, Jun. 2017, Vol. 31, No.6   ·干细胞与组织工程· BMP-2 和地塞米松对人牙髓细胞增殖 和分化的影响 1 1 1 1 2 陆彦玲 ，林田，刘玉莹，包丽荣，吴煜 1. 广西医科大学（南宁   530021 ） 2. 广西医科大学附属口腔医院儿童牙病科（南宁   530021 ） 【摘要】   目的    通过将 BMP-2 和地塞米松分别及联合作用于体外培养的人牙髓细胞，探讨两者对牙髓细胞 增殖和分化能力的影响。方法    取 25 岁以下患者因正畸原因拔出的无病变牙牙髓组织，采用组织块法体外培养 人牙髓细胞并传至第3代，行波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学染色鉴定。取生长状况良好的第 3 ～5 代牙髓细胞分 为 4 组，A、B、C 组分别加入 100 ng/mL BMP-2、1×10–8 mol/L 地塞米松、100 ng/mL BMP-2 以及 1×10–8 mol/L 地塞 米松，D 组不添加诱导剂作为对照组。培养 1、3、5、7 d 绘制细胞生长曲线；培养 5、7 d 行 RT-PCR 检测成牙本质 细胞形成标记基因表达情况，包括牙本质涎磷蛋白（dentin sialophoshoprotein ，DSPP ）、牙本质基质蛋白 1 （dentin matrix protein 1 ，DMP-1 ）、ALP ；培养 14 d 行 ALP 染色并计算阳性染色面积占总面积比值；培养 21 d 行 茜素红染色并测定 562 nm 波长处吸光度（A ）值。结果    成功分离培养呈长梭形的人牙髓细胞，经波形蛋白和角 蛋白免疫细胞化学染色鉴定显示符合牙髓细胞的生物学特征。随培养时间延长，各组细胞均逐渐增加，5 d 时达 峰值，7 d 时降至 3 d 水平。培养 5 d ，A、B、C 组细胞显著多于 D 组，C 组多于 A 组，A 组多于 B 组，比较差异均 有统计学意义（P0.05）。RT-PCR 检测示，培养 5 d ，A、B、C 组 ALP、DSPP、DMP-1 mRNA 相对表达量均显著高 于 D 组，C 组显著高于 A、B 组，差异均有统计学意义（P0.05）；A、B 组间比较差异无统计学意义（P0.05）。培 养 7 d ，除 A、B、C 组 DSPP mRNA 相对表达量显著高于 D 组（P0.05）外，其余各组间各基因相对表达量比较差异 均无统计学意义（P0.05）。培养 14 d ALP 染色示，各组可见紫黑色沉淀，其中 C 组着色程度最深；经半定量测 定，C 组阳性染色面积占总面积比值显著高于 A、B、D 组，A、B 组高于 D 组，差异均有统计学意义（P0.05）；A、 B 组间差异无统计学意义（P0.05）。培养 21 d 茜素红染色示，C 组矿化结节呈片状大面积分布，A、B 组呈散在分 布，D 组无矿化结节形成；各组间 A 值比较差异均有统计学意义（P0.05）。结论    BMP-2 对牙髓细胞的增殖作 用比地塞米松更明显，两者对牙髓细胞分化作用差异不明显；但与单独应用相比，两者联合应用对牙髓细胞的增 殖和分化有明显促进作用。 【关键词】  BMP-2 ；地塞米松；牙髓细胞；增殖分化 Effect of bone morphogenetic protein 2 and dexamethason on proliferation and differentiation of human dental pulp cells in vitro 1 1 1 1 2 LU Yanling , LIN Tian , LIU Yuying , BAO Lirong , WU Yu 1. Guangxi Medical University, Nanning Guangxi, 530021, P.R.China 2. Pediatric Dentistry Department, College of Stomatology, Guangxi Medical University, Nanning Guangxi, 530021, P.R.Chin