葡萄糖氧化酶法测定人体静脉血中血糖含量不确定度评定.docVIP

葡萄糖氧化酶法测定人体静脉血中血糖含量不确定度评定根据2008年度中央补助地方中国居民营养与健康监测项目的要求,对哈尔滨市南岗区部分社区居民进行血糖测定。为了对用葡萄糖氧化酶法测定人体静脉血中血糖的测量方法进行系统研究,通过分析测量中可能导致不确定度的来源,对测量结果进行不确定评定,使测量结果更加完整,以提高葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的准确度。 1 材料与方法 1. 1主要仪器与试剂 由项目办统一订购血糖液体试剂盒;722型分光光度计。 1.2 实验步骤 分别用10 ml B级分度吸管吸取3 ml工作液于5 ml试管中。分别加入蒸馏水、标准品、盲样20 μl,混匀,37℃水浴10 min,用1 cm比色杯,505nm处比色。以空白调零,分别读取吸光度。 2 不确定度的评定过程与结果 2.1 被测样品浓度的数学模型 C= A×C0A0; C―样品中葡萄糖的浓度,mmol/L; C0―葡萄糖标准溶液的浓度,mmol/L; A― 样品的吸光度, A0―葡萄糖标准溶液的吸光度,由上式可以看出:C的不确定度与A、C0、A0的不确定度相关,可导出样品C的相对标准不确定度为: U(C)=u(c)C=u(c0)c02+u(A0)A02+u(A)A2即urel(c)=urel(c0)2+urel(A0)2+urel(A)2 2.2 各分量不确定度的分析与计算 2.2.1 葡萄糖标准溶液浓度产生的相对标准不确定度UrelCs 葡萄糖标准溶液浓度为5.55 mmol/L,从试剂盒使用说明书中查得其准确性偏差≤10%。按矩型分布考虑,K=3,则葡萄糖校准溶液浓度产生的相对标准不确定度为UrelCs=10%3=5.77% 2.2.2 20μl移液器引起的相对标准不确定度Urel(V20 μl) 2.2.2.1 容量允差 根据JJG646-2006《移液器检定规程》规定20μL可调移液器吸取20μL时容量允差为4%。取矩形分布20×4%3=0.46 μl。 2.2.2.2 温度带来的不确定度(假设有8℃差异):体积变化V×液体膨胀系数×△T=20×2.1×10-4×8=0.0366 μl,P=0.950.0366/1.96=0.0171 μl。移液器带来的合成不确定度0.462+0.01712=0.460μl,相对不确定度Urel(V20 μl)=0.46020=2.3%。 2.2.3 10.0 mlB级分度吸管引起的相对标准不确定度Urel(V10 ml) 2.2.3.1 容量允差 根据JJG196-2006《常用玻璃量器检定规程》规定10 mlB级流出式分度吸管容量允差为0.10 ml。取矩形分布100 μl3=57.7 μl。 2.2.3.2 温度带来的不确定度(假设有8℃差异):10000×2.1×10-4×8=16.8 μl,P=0.9516.81.96=8.57 μl,10.0 ml分度吸管带来的合成不确定度57.72+8.572=58.3μl, 相对标准不确定度urel(V10 ml)=58.3μl10000μl=0.583%。 2.2.4 吸光度A和A0的相对标准不确定度Urel(A0)和Urel(A) 吸光度A和A0的标准不确定度分量是由定量重复性引起的不确定度。本试验采用外标法与标准比较来进行定量,36次测得质控样品中血糖平均浓度为C=8.22 mmol/L。 表1 样品与标品吸光度的测定结果 36次结果平均吸光度S 标准A00.2058750.0058350995 样品A0.300250.030021301 Urel(A0)=u(A0)A0=0.0058350995/360.205875=0.47% Urel(A)=u(A)A=0.030021301/360.30025=1.66% 3 样品的合成不确定度 样品中血糖含量相对合成不确定度 UrelC=(5.77%)2+(2.3%)2+(0.583%)2+(0.47)%2+(1.66)%2=6.5% 4 扩展不确定度 取扩展系数为K=2,则C的扩展不确定度为 U=k×UrelC=2×6.5%=13% 5 结果与计论 由计算结果可以看出,在葡萄糖氧化酶法测定人体静脉血中血糖含量的过程中,对合格的玻璃器材、标准溶液准确性、测量重复性等分量进行了不确定度评定,其中标准溶液准确性及测量重复性是该方法不确定度的主要来源。建议使用国家有证标准溶液、采用标准曲线法代替单点法进行测量。 参 考 文 献 [1] JJF1059-1999测量不确定评定与表示.