吸光光度法根据物质对一定波长光线的吸收程度以确定物质.PPT

第十四章 吸光光度法 一、光的本质与颜色 二、吸收光谱曲线 三、光的吸收定律 四、工作曲线 五、光度分析计算示例 台职院生化系 奚立民副教授 第七章 吸光光度法根据物质对一定波长光线的吸收程度以确定物质含量的分析方法 一、光的本质与颜色 光的本质 E=hν= 光具有波粒二象性，λ越大，E越低。 即长波能量大 ，短波能量小。 粒子性 波动性 (1)可见光的颜色与波长 　　　　　　　　　　　　　　　 　　 400　 　 750 λ/nm 可见光（范围无严格界限） 电磁波谱图 （2）互补色光 将两种适当的色光按一 定强度比例混合后，也可以 成为白光。这两种色光称为 互补色光。 互补色光图 红 紫 橙 兰 黄 青兰 绿 青 例如： 是由各种色光按一定比例 混合而成的混合光。 若将互补色光图中对角线 上的两种色光按一定比例混合， 也可以形成白光。如红与青、 黄与兰、绿与紫等。不在对角 线上的两种色光，无论按任何 比例混合都不可能形成白光。 2. 由透过光颜色（即吸收光的互补色）决定。 例如硫酸铜溶液因吸收了白光中的黄色光而呈兰色。 例如高锰酸钾溶液因吸收了白光中的绿色光而呈紫色。 有时晚霞天空呈 红色是因为大气层 吸收了白色阳光中 的青光，而进入我 们眼睛的透过光所 以呈红色。 黑色、白色、灰色是对白光中的各种色光进行全吸收、全不吸收和均匀吸收的结果。可归属于三种极端颜色。 二、吸收光谱曲线 不同浓度KMnO4溶液的吸收曲线 　λmax=525nm 　　　最大吸收波长 吸收光谱曲线的主要特点 （1）λmax与浓度C无关。曲线形状随吸光物质的分子结构不同而不同，利用这一特点可用来进行定性分析。 （2）A与C有关。其中A为吸光度，随浓度C增大而增大，利用这一特点可用来进行定量分析。 吸光光度法主要用于定量分析，哪么如何根据A与C的关系来进行定量分析呢 三、光的吸收定律 1. 公式推导（碰撞理论） -dI∝NI 表示光强减弱 物质分子数 若溶液浓度为C（mol/L）, y 则N=C×6.02×1023 ? x ?y ? db ?10-3 入射光Io 故 -dI=k’NI=k’? 6.02×1020 ? x ?y ? C ? db ? I x 透过光It db db为无限的薄层 比例常数 b (cm) I为在db中吸收光 如果特制x，y为统一规格，则k’? 6.02×1020 ? x ?y =k（常数） 的强度 ∴ -dI/I=kCdb