南极嗜冷菌Marinomonas sp. NJ522的低温超氧化物歧化酶和其生境适应性研究.pdf

南极嗜冷菌Marinomonas spNJ522的低温超氧化物歧化酶及其生境适应性研究 inomonas 南极嗜冷菌Mar sp．NJ522的低温超氧化物歧化酶 及其生境适应性研究 摘要 极端微生物在极端环境长期适应过程中形成了独特的性质。对它们的研究不 仅对了解生命的极限、进化与分类等具有重大理论价值，而且对环境污染、生态、 微生物新功能等具有重要的实际意义。近年来南极微生物的低温催化活性和环境 适应性受到人们的极大关注。超氧化物歧化酶是生物体防御氧化损伤的一种十分 重要的生物酶，是抗氧化酶系统中最重要的组成酶。它是唯一以超氧阴离子自由 基为底物的酶，可以催化超氧阴离子的歧化反应产生分子氧和过氧化氢，在南极 细菌对恶劣环境的适应中具有重要作用。目前对南极低温酶的研究日益增多，但 对南极微生物低温超氧化物歧化酶的研究还尚未见报道。 本研究从南极细菌中筛选产低温超氧化物歧化酶的菌株Marinomonas sp． NJ522，并研究影响超氧化物歧化酶产量的因素、进一步优化产酶条件，对南极 细菌Marinomonas sp．NJ522超氧化物歧化酶进行分离纯化，得到均一产品，详细 阐明该酶的性质。并以Marinomonas sp．NJ522为材料从生化组成(脂肪酸和蛋白 质)及抗氧化酶的角度，进一步阐明南极细菌的环境适应机制(包括低温、高盐和 重金属)，以期为获得超氧化物歧化酶的新来源，并且进～步探明南极细菌对胁 迫的适应机制提供科学依据。 (1)参照超氧化物歧化酶活力和生物量两个指标，从421株南极细菌中筛选 长温度在10～15℃之间，在O℃均能生长，都属于嗜冷菌。它们所产的超氧化物 歧化酶均属于低温酶。4株南极嗜冷菌均含有一种类型的SOD同工酶。NJ62的 Fe—SOD。可见，南极嗜冷菌有可能成为超氧化物歧化酶的新来源。 (2)通过形态学观察和16S rDNA序列对4株产低温超氧化物歧化酶的南极 南极嗜冷菌MarinomonasNJ522的低温超氧化物歧化酶及其生境适应性研究 sp (Pseudoalteromonas sp．)；NJ522和NJ548属于假单胞菌 科(Shewanellaceae)，希瓦氏菌属Shewanella sp．)。 (3)以南极嗜冷菌Marinomonas sp．NJ522为材料，测定培养条件和营养因子 对南极嗜冷菌NJ522生长和超氧化物歧化酶的影响，并在摇瓶培养条件下对南极 嗜冷菌NJ522产超氧化物歧化酶的条件进行优化。研究结果表明：通气量越大， 7．0，最适温度为 菌株的生物量和SOD的活性越高；最适接种量4％，最适初始pH IO*C，葡萄糖为最优的碳源，蛋白胨为为最佳氮源。在单因素水平的基础上，优 化的嗜冷菌NJ522摇瓶发酵SOD的最适条件为：培养基中蛋白胨为7．5鲋，，葡萄 7．0，于10*C， 糖为15 lg／L，1000ml陈海水，初始pH g／L，酵母提取物19／L，NaCI h。 以120r／min转速，振荡培养120 (4)以硫酸铵沉淀、离子交换和凝胶过滤等方法，对南极嗜冷菌NJ522超 氧化物歧化酶进行分离纯化。结果表明，南极嗜冷菌NJ522的超氧化物歧化酶