试验八 饲料中游离棉酚测定.docVIP

试验八 饲料中游离棉酚的测定 1、实验目的：通过本实验，使学生掌握棉籽粕中游离棉酚测定方法。 2、基本技能训练内容：所涉及仪器的正确使用，游离棉酚的毒害作用。棉籽粕中游离棉酚测定方法。 3、主要仪器设备和药品：分光光度计、振荡器：振荡频率120～130次/min（往复）、恒温水浴、具塞三角烧瓶 ：100、250mL、25mL容量瓶（棕色）、吸量管（1、3、10mL）移液管（10、50mL）漏斗、表玻璃（直径60mm）；异丙醇、正己烷、冰乙酸、苯胺、3-氨基-1-丙醇、异丙醇-正己烷混合溶剂 ：6∶4（V/V）、溶剂A（量取约500mL异丙醇、正己烷混合溶剂、2mL3-氨基-1-丙醇、8mL冰乙酸和50mL水于1 000mL的容量瓶中，再用异丙醇-正己烷混合溶剂定容至刻度） 4、实验方法： 采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。 称取1～2g试样（精确到0.001g），置于250mL具塞三角烧瓶中，加入20粒玻璃珠，用移液管准确加入50mL溶剂A），塞紧瓶塞，放入振荡器内振荡1h（每分钟120次左右）。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗上加盖一表玻璃以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液， 收集滤液于100mL具塞三角烧瓶中。 用吸量管吸取等量双份滤液5～10mL（每份约含50～100μg的棉酚）分别至两个25mL棕色容量瓶a和b中，如果需要，用溶剂A补充至10mL。用异丙醇-正己烷混合溶剂稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。用移液管）吸取2份10mL的溶剂A分别至两个25mL棕色容量瓶a0和b0中。用异丙醇-正己烷混合溶剂补充瓶a0至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。加2.0mL苯胺于容量瓶b和b0中，在沸水浴上加热30min显色。冷却至室温，用异丙醇-正己烷混合溶剂定容，摇匀并静置1h 。用10mm比色池，在波长440nm处，用分光光度计以a0为参比溶液测定空白测定液b0的吸光度，以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度，从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值，得到校正吸光度A。 计算公式 式中 ：X── 游离棉酚含量，mg/kg； A──校正吸光度； m── 试样质量，g； V── 测定用滤液的体积，mL； a── 质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1·g-1·L。 每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到20mg/kg。 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值： 在游离棉酚含量小于500mg/kg时，不得超过平均值的15％； 在游离棉酚含量大于500mg/kg而小于750mg/kg时，不得超过75mg/kg； 在游离棉酚含量超过750mg/kg时，不得超过平均值的10％。