食品中着色剂测定.doc

食品科学学院本科实验项目 实验项目名称 食品中着色剂的测定 所属课程 食品分析与检验 所适专业 食品科学与工程、食品质量与安全? 带课教师 ?丁晓雯 实验要求 ?必修或选修 关键词 ?着色剂、纸层析法 实验目的 (1) 学习各类色素测定的原理与方法； (2) 掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。 所用教材 吴谋成. 食品分析与感官评定[M].北京:中国农业出版社. 2002. 实验类型 1 1.基础性实验; 2. 综合与设计性实验; 3.研究与创新型实验 基本描述 聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。 所用主要仪器设备 分光光度计、微量注射器或色素吸管、展开槽（25×6×4cm）、层析缸、薄层板（5×20cm） 实验学时 3 是否特色 ?是 实验7 食品中着色剂的测定 1 实验目的 (1) 学习各类色素测定的原理与方法； (2) 掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。 2 实验原理 聚酰胺是具有二极性的化合物，水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。 3 试剂与仪器 主要试剂：聚酰胺粉(尼龙6)、硫酸（1：10）、甲醇-甲酸溶液（6：4）、甲醇、20％柠檬酸溶液、10％钨酸钠溶液、石油醚、海砂、乙醇-氨溶液、50％乙醇溶液、硅胶G、盐酸（1：10）、5％氢氧钠溶液、碎瓷片、展开剂[a、正丁醇-无水乙醇-1％氨水(6：2：3)；b、正丁醇-吡啶-1％氨水(6：3：4)；c、甲乙酮-丙酮-水(7：3：3)；d、甲醇-乙二胺-氨水(10：3：2)；e、甲醇-氨水-乙醇(5：1：10)；f、2.5％柠檬酸钠-氨水-乙醇(8：1：2)。]：供薄层色谱用、色素标准品（胭脂红；苋菜红；柠檬黄；靛蓝；日落黄；亮蓝：纯度均为60％。）。 主要仪器：分光光度计、微量注射器或色素吸管、展开槽（25×6×4cm）、层析缸、薄层板（5×20cm）、电吹风机、水泵 4 操作与结果 ?(1) 样品处理 ?① 果味水、果子露、汽水：吸取50.0毫升样品于100毫升烧杯中，汽水需加热驱除二氧化碳。 ② 配制酒：吸取100.0毫升样品于烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。 ③ 硬糖：蜜饯类，淀粉软糖：称取5.0或10.0克粉碎的样品，加30毫升水，温热溶解，若样液PH值较高，用20％柠檬酸溶液调至PH4左右。 ④ 含蛋奶的样品 a奶糖：称取10.0克粉碎均匀的样品，加30毫升乙醇-氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约20毫升，立即用1：10硫酸调溶液至微酸隆再加1.0毫升1：l0硫酸，加1毫升l0％钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。 b 蛋糕类：称取10.0克粉碎均匀的样品，加海砂少许，混匀、用热风风干样品(用手摸已干燥即可以)，加入30毫升石油醚搅拌，放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理三次，以除去脂肪吹干后研细，全部转人G3垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇—氨溶液提取色素，直至色素全部提完以下按(1)自“置水浴下浓缩至约20毫升”起依法操作。 (2) 吸附分离 将处理后所得的溶液加热至70℃，加入0.5-1.0克聚酰胺粉充分搅拌，用20％柠檬酸溶液调PH至4，使色素完全被吸附，若溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。将吸附色素的聚酰胺全部转入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤(如用G3垂融漏斗过滤，可以用水泵慢慢地抽滤)。用20％柠檬酸酸化PH＝4的70℃水反复洗涤，每次20毫升，边洗边搅拌，若含有天然色素再用甲醇-甲酸溶液洗涤1-3次，每次20毫升，至洗液无色为止。再用70℃水多次洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部色素，收集全部解吸液，于水浴上驱氨。如果为单色，则用水准确稀释至50毫升，用分光光度法进行测定。如果为多种色素混合液，则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定，即将上述溶液置水浴上浓缩至约2毫升后移人5 (3) 定性分析 ① 纸色谱 精密称取各色素各0.100克，用PH6的水溶解，移入100毫升容量瓶中并稀释至刻度，即为色素标准溶液（每毫升相当于1毫克商品色素）。靛蓝溶液需在暗处保存。取色谱用纸，在距底边2cm的起始线上分别点3-10微升样品溶液，1-2微升色素标准溶液，挂于分别盛有a、b、c、d、e、f的展开剂的层析缸中，用上行法展开，待溶剂前沿展至15cm处，将滤纸取出于空气中晾干，与标准斑比较定性。 也可取0.5毫升样液，在起始线上从左到右点成条状，纸的右边点色素标准溶液，依法展开，晾干后先定性后定量，靛蓝在碱性条件下易褪色可用e展开剂。 ② 薄层色谱 a 薄层板的制备 称取1.60克聚胺粉，0.4克可溶性淀粉