一株降烟碱细菌的筛选鉴定及降解特性研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１１）：８２～８５ 一株降烟碱细菌的筛选、鉴定及降解特性研究 李　珏　赵建新　田丰伟　陈　卫　张　灏 （江南大学食品学院　无锡　２１４１２２） 摘要　以烟碱为唯一碳源，从湖南张家界烟草种植地的土壤中分离得到一株降解烟碱能力较好 的菌株。经常规形态观察和生理生化实验结果表明，该菌为放射形土壤杆菌或根癌土壤杆菌 （Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ／ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）。研究表明，该菌的降解烟碱最适ｐＨ和温度分别为７．０和 ３０℃。该菌能够利用烟碱为唯一碳源，在含烟碱的培养基中发酵液呈淡黄色—绿色—墨绿色—深 棕色变化，培养４８ｈ后，烟碱的降解率可达７１％，具有较好的烟草工业应用前景。 关键词　烟碱　降解　放射形土壤杆菌　根癌土壤杆菌 中图分类号　ＴＳ４１４ 　　烟碱是普通烟草 中的生物碱，俗称尼古丁 １　材料与方法 （Ｎｉｃｏｔｉｎｅ）。目前，我国烤烟烟碱含量偏高，尤其上部 烤烟更加明显，烟碱达到３％～４％，白肋烟烟碱含量甚 １．１　材　料 ［１］ 至高达 ６％ ，而美国烤烟的烟碱含量在 １．５％ ～ １．１．１　采样地点　土壤样品采自湖南烟草种植地。 ［２］ ３．５％之间，其白肋烟的烟碱含量约２．９％ 。一般优 １．１．２　主要试剂和器材　Ｎｉｃｏｔｉｎｅ（含量 ９８％，洛阳 ≥ 质白肋烟的烟碱含量在１．５％～４．０％之间，以３．０％为 天科生物工程有限公司）；紫外分光光度计（ＵＶ２１００， 佳。国内卷烟企业储存的上部烤烟较多，因其烟碱含 ＵＮＩＣＯ公司）；离心机（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ３２Ｒ，德国ＨＥＴＴＩＣＨ 量较高而难以较多用于叶组配方中，造成巨大的浪费。 公司）。 　　当前国内研究较多的是用过滤嘴过滤、打孔稀释 １．１．３　 培养基　 烟碱培养基：１３．３ｇＫＨＰＯ， ２ ４ 及使用烟草薄片等物理措施来降低烟碱含量，但是这 ４ｇＫＨＰＯ，０．１ｇ（ＮＨ）ＳＯ，１ｇ酵母提取物，１０ｍｌ微量 ２ ４ ４ ２ ４ 些方法会造成烟、香、气的损失。利用微生物处理来降 元素（１ｇＭｇＳＯ ·７ＨＯ，０．４ｇＭｎＳＯ ·ＨＯ，０．２ｇＣａＣｌ ４ ２ ４ ２ ２ 解烟碱，既不会造成烟香的损失，还可以改进烟气的品 ·２ＨＯ，０．２ｇＣｕＣｌ·２ＨＯ，０．０２ｇＦｅＳＯ ·７ＨＯ，用０．１ ２ ２ ２ ４ ２ 质，提高烟叶资源的利用率，具有较强的研究开发价 ｍｏｌ／ＬＨＣｌ溶解到 １００ｍｌ）。加蒸馏水到 １０００ｍｌ，自然 ［３］ 值。Ｂｒｏｗｎ＆Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ烟草公司 利用假单胞杆菌 ｐＨ。培养基１２１℃高压蒸汽灭菌２０ｍｉｎ后，４ｍｌ烟碱用 （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄ）对烟草中的烟碱进行降解，发现用 ０．