正常大鼠腹膜透析模型中腹膜血管新生与HIF一1Q及VEGF的.PDFVIP

·242· 空垦生酉医结盒竖痘盘壶!Q塑生≥旦筮2鲞筮≥塑g!!]坚盥：丛!望h2Q塑：№!：!：盥Q：§ 正常大鼠腹膜透析模型中腹膜血管新生与 HIF一1Q及VEGF的表达研究 张晓东① 宋保利① 方敬爱① 在腹膜组织中的表达，同时观察腹膜血管新生改变。结果：在两组腹透组中HIF一1Q及VEGF基因表达明显增高，与正常组 及假手术组相比较有差异，并且腹膜血管新生改变。结论：HIF一1a及VEGF在慢性肾衰竭腹膜透析模型腹膜组织中存在基 因表达，可能通过促进腹膜血管新生，参与腹膜透析超滤改变。 [关键词]HIF—la VEGF腹膜血管新生 腹膜透析是肾脏病替代治疗的重要方法之一，随着腹膜透 Antisense 284 析的广泛开展，腹膜透析失超滤成为其退出治疗的主要原因 bp；GAPDH弓I物：Sense 之一【l2J。研究表明，腹膜存在血管新生现象，是腹膜超滤衰竭GC玎GAG一3’：Anti—sense 的因素之一，与VEGF相关【3．4J，但VEGF产生原因并未明确。一37，扩增片断大小：626 bp，均由上海生工生物工程有限公司 HIF-la是细胞及系统中氧稳态的重要调节因子ISJ，在低氧条 合成。HIF—la引物PCR反应参数：预变性95℃5min，然 件或正常氧条件下，可控制体内靶基因的转录活化，从而调节 后，94℃变性45S，54℃退火30S，72℃延伸458，共36个循 红细胞生成、血管新生、糖分解代谢等机体病理生理反应。本 环，反应结束前72℃10 文试图研究HIF—la及VEGF在腹膜透析模型中腹膜的表达，参数：预变性95℃5rain，然后，94℃变性50s，54℃退火36S， 并初步探索其意义。 72℃延伸45s，共34个循环，反应结束前72℃10rain充分延 伸，分别经过对不同循环数PCR产物分析，使PCR扩增控制在 材料与方法 指数期。PCR产物经2％的琼脂糖凝胶进行电泳，应用Swart 1材料与试剂采用医用硅胶管，自制仿人类透析管；腹 透液(1．5％及4．25％)，百特医疗用品公司提供；腹透连接管，内参照，计算HIF一1口及VEGF的相对表达量。 Quinton公司提供；RT—PCRkit试剂盒，购于大连TAKARA 5免疫组化及HE染色免疫组化：以PBS代替一抗作 公司；兔抗鼠VEGF多克隆抗体，购于武汉博士德公司；羊抗兔阴性对照，石蜡切片水化后，0．3％H202室温下阻断内源性过 二抗一HRP，购于华美生物工程公司；ECL试剂，购于华美公氧化物30rain，正常血清封闭，微波抗原修复3～5min，加入兔 司。 抗鼠VEGF多克隆抗体(1：100稀释)37℃孵育1h，PBS洗 h，室温下辣根 2模型建立及分组清洁级健康40只雄性SD大鼠，体3次，加生物素化的羊抗兔二抗，37℃孵育1．5 重平均250 过氧化物酶(卜Ⅱ冲)标记抗生物素1h，DAB显色，苏木索复染， g。试验分组：正常组10只，假手术组lO只，1．5％ 腹膜透析液组8只，4．25％腹膜透析液组8只。参考文献基础中性树胶封片。HE染色：常规进行。 上制作腹膜透析模型【4|，于第1周内每日每只肝素50u经透析 6统计学方法计量数据以(j±s)表示，单因素方差检 管腹腔注入，1周后开始腹膜透析治疗。透析过程：每日每只 验(双侧)分析，方差齐性的两样本均数比较。采用SAS软件包 大鼠腹膜透析液20“经腹膜透析管注入，腹腔保留2h后放 进行统计分