糖试验技术模块教案.DOC

糖实验技术模块教案 教学目的要求： （1）掌握淀粉制备的方法，了解生物大分子制备方法。 （2）掌握糖的滴定分析方法，了解糖的其他分析方法。 （3）了解糖链的生物学意义和糖链制备方法。 2.教学时间：12课时、 3.教学方式：讲授、实验 4.讲稿 实验一 淀粉的提取、水解和测定 利用直链淀粉和支链淀粉不溶于温水的原理，将地瓜捣碎后，静置于温水中，淀粉沉积在烧杯的底部而与组织部分分离。 淀粉的水解有酸法水解和酶法水解，工业上的酸法水解是在100℃以上的高温条件下进行的，这样产生的葡萄糖会发生聚合反应，形成龙胆二糖、麦芽糖等低聚糖，还会进一步分解形成羟甲基糠醛、乙酰丙酸等化合物，这样得到的糖液色泽较深，味道变差。 糖的定量测定可以根据其物理性质或化学性质，通过测定糖液的折射率、比重和旋光，可以测定出糖液中固形物的含量，工业上通常采用这类方法。通过化学反应定量的方法有滴定法和比色法，Folin-酚试剂法和碱性铜试剂法属于滴定法；3，5-二硝基水杨酸法和蒽酮反应法属于比色法。Folin-酚试剂法和碱性铜试剂法的原理相同，都是利用二价铜被还原糖还原成一价铜，再测定一价铜的含量而对还原糖的含量进行间接测定，但后者对前者作了改进，在滴定过程中，反应液无须处于微沸状态。各种比色法是利用还原糖与试剂生成特殊的有色物质，且还原糖的含量与有色物质的生成量有正比关系，先做出[S]∝A的标准曲线,测出待测还原糖的A后,从标准曲线上求出还原糖的含量. 实验二 酶的激活剂和抑制剂 酶的激活剂大部分是无机离子,包括钠离子、钾离子、钙离子等阳离子和氯离子、溴离子、碘离子等阴离子;此外,小分子有机物,如抗坏血酸、谷胱甘肽等,对含-SH的酶有激活作用,EDTA、柠檬酸等能去除酶的抑制剂,也属于激活剂. 《生化样品制备与分析》第一阶段总结 成绩与问题: 我们利用四周的时间完成了8个实验,已完成了第一阶段的教学任务.总体感觉不错,表现在: Δ、同学的学习态度认真,有相当部分同学预习较深,实验原则掌握透彻,试验进展顺利,结果较好;部分同学试验出现失误,但能多次重做到获的良好结果为止. Δ、同学们准时到课室,没有出现缺课,逃学现象. Δ、其他实验室规章制度遵守好,如损坏东西登记,卫生做得特别好. Δ、教师上课认真负责,各方法原理交代清楚,讲课有宽度、PH→最佳酶促反应温度→酶反应动力学系统的学习. 表现还欠缺的问题： Δ、部分同学预习不够深入，对方法原理体会不深，对操作步骤中为什么要这样做而不能那样做的问题理解不够，出现操作上的失误。如温度对酶活性影响中，为什么要设计置冰箱理解不好。 Δ、操作上的失误还表现在一些常规的操作方法掌握不牢。如移液管的使用、分光光度计使用上的不规范等；如同组的重复样品，OD值有0。287、0。183这样大的误差等。 Δ、实验报告中所反映出的实验数据理想化（被修改过），写作也不规范。 Δ、仪器数量少，试剂浪费严重等。 与糖有关的实验的拓展 糖生物学被称为继核酸蛋白质之后的第二里程碑，其反馈的生物信息却远远大于核酸和蛋白质，其重要性涉及到受体、供体、信号传导、免疫、生物合成代谢等生物学重要问题，所以我们虽然学习了糖的一个系统性实验，这个系统的取材是淀粉丰富的材料甘薯，是多糖，含葡萄糖，而生物学中的许多内容与生物研究有关热点是糖蛋白，其种类繁多，组成复杂，所以所学习的系统表现出简单化的局限性。因此同学们会问：糖蛋白中的寡糖和糖链是怎样分离纯化的？其设计原理是什么？请看这张分离纯化程序图： （一）糖蛋白中寡糖和糖链的分离纯化 —— 高等动、植物，微生物，地衣海藻等材料 醇、醚回流脱脂 （冷水，热水，碱性水，酸性水）水抽提（含有许多杂物质，如无机盐，低分子和大分子有机物） 分 离 离子交换、凝胶过滤、透析（去掉小分子） 蛋白酶，木质素酶等 酶解（去掉原有大分子蛋白） —— 氯仿或三氟三氯乙酸振荡（得水相，去蛋白）