三种甘薯病毒多重犚犜 犘犆犚检测技术的建立 - 植物保护.PDF

　 犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀 实 验 方 法 与 技 术 犈狓犲狉犻犿犲狀狋犪犾犕犲狋犺狅犱牔犜犲犮犺狀狅犾狅 狆 犵狔 三种甘薯病毒多重犚犜犘犆犚检测技术的建立 １ ３ ２ １ １ １ 蒋素华 ， 程喜梅 ， 宋彩霞 ， 许申平 ， 梁 芳 ， 崔 波 　 　 　 　 　 　 　 （ 郑州师范学院生物工程研究所，郑州 ； 河南农业大学生命科学学院，郑州 ； １． ４５００４４ ２． ４５０００２ 　 　 郑州拓洋实业有限公司，郑州 ） ３． ４５０００１ 　 摘要 本文根据 中甘薯 病毒（ ）、甘薯卷叶病毒（ ）和甘薯羽状斑驳病毒（ ）外壳蛋白 ＧｅｎＢａｎｋ Ｇ ＳＰＶＧ ＳＰＬＣＶ ＳＰＦＭＶ 　 （ ）基因序列设计特异引物，对多重 退火温度、延伸温度、模板浓度、引物浓度进行改良优化，建立能同时 ＣＰ ＲＴＰＣＲ 检测 种甘薯病毒的多重 方法。该方法能同时扩增出 、 和 特异片段，其大小分别 ３ ＲＴＰＣＲ ＳＰＶＧＳＰＬＣＶ ＳＰＦＭＶ 是 、 和 。测序结果表明，扩增出的 种病毒序列与相应参考序列相似性达到 以上。灵敏度分析 ８００２７６ ５７０ｂｐ ３ ９８％ 结果表明，多重ＲＴＰＣＲ方法能够检测ｃＤＮＡ的量为０．１ｎｇ。应用建立的多重ＲＴＰＣＲ检测方法对田间样品进 行检测，结果显示该方法可以特异、快速、灵敏地同时检测 种甘薯病毒。这些研究结果可为甘薯病毒检测提供 ３ 参考。 关键词 甘薯； 病毒； 多重ＲＴＰＣＲ 　 　 　 中图分类号： ， 文献标识码： ： ／ Ｓ４３５．３１ Ｑ７８９ Ａ 犇犗犐 １０．３９６９．ｉｓｓｎ．０５２９ １５４２．２０１７．０１．０２１ 　 　　 　 　　 　 ｊ 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳犿狌犾狋犻犾犲狓犚犜犘犆犚狊狊狋犲犿犳狅狉犱犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳 狆 狔 狋犺狉犲犲狏犻狉狌狊犲狊犻狀狊狑犲犲狋狅狋犪狋狅 狆 １ ３ ２ １ １ １