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目 录
目习乇…………………………………………………………………………………………………………．．1
摘要………………………………………………………………………………………I
Abstract……………………………………………………………………………………………………………III
1 文献综述……………………………………………………………………………1
1．1植物miRNAs的概述…………………………………………………………．1
1．1．1植物miRNAs的发现……………………………………………………1
1．1．2植物miRNAs的生物合成………………………………………………1
1．1．3植物miRNAs的作用机制………………………………………………3
1．1．4
miRBase数据库…………………………………………………………3
1．1．5
miRNA靶基因的预测和鉴定…………………………………………一4
1．2植物miRNAs功能研究………………………………………………………．5
1．3拟南芥miR319及其靶基因研究进展…………………………………………7
1．3．1
AtmiR319基因概述……………………………………………………．．7
1．3．2AtmiR319靶基因TCP研究……………………………………………．8
2引言…………………………………………………………………………………………………………11
2．1研究目的和意义………………………………………………………………11
2．2技术路线……………………………………………………………………．．12
3实验材料与方法……………………………………………………………………．13
3．1实验试剂与仪器……………………………………………………………．．13
3．1．1实验材料………………………………………………………………13
3．1．2主要试剂………………………………………………………………．13
3．1．3各类抗生素和激素配制………………………………………………．14
3．1．4各类培养基……………………………………………………………．15
6
3．1．5主要仪器………………………………………………………………．1
3．2基本实验方法………………………………………………………………．．17
3．2．1植物材料的种植………………………………………………………．17
3．2．2
CTAB法抽提矮牵牛基因组DNA……………………………………17
3．2．3矮牵牛总RNA的提取………………………………………………一17
3．2．4第一链cDNA的合成…………………………………………………18
3．2．5连接产物转化大肠杆菌、PCR鉴定及测序分析……………………19
3．2．6农杆菌介导的遗传转化………………………………………………21
3．3．1基因克隆的引物设计…………………………………………………23
3．3．2 RACE技术克隆5’．端和3’一端cDNA序列…………………………23
3．3．3
hi．TAIL扩增启动子……………………………………………………24
3．3．4全长拼接………………………………………………………………．24
3．3．5生物信息学分析………………………………………………………．25
3．3．6荧光定量PCR分析……………………………………………………25
3．3．7荧光定量PCR引物设
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