促减数分裂甾醇（MAS）对猪卵母细胞减数分裂成熟及精子功能影响.pdfVIP

摘要 a脱甲基酶(CYP51)催化羊毛 是胆同醇生物合成途径中的中间代谢物。FF．MAS由羊毛甾醇14 鼠等小动物上关于FF—MAS的促卵母细胞减数分裂的能力及作用机制的报道存在不同的看法，而 且在大动物上有关MAS研究的报道极少。本论文首次以大动物为研究对象，较系统地探究了 MAS在猪卵母细胞体外成熟及精于功能中的作用及机制。研究结果如下： 试验～研究了MAS对猪卵母细胞体外减数分裂恢复的作用及可能的作用机制。将采自猪 及RS21607可剂量依赖性的抑制FSH诱导的卵母细胞减数分裂恢复的发生及卵丘扩展。而且 RS21745对卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用同样表现出时问依赖性。同时，本研究得到， Chloride进行 卵母细胞减数分裂恢复，我们利用PKC的激动剂PMA及其抑制剂Chelerythrine 5—10肚M Chelerythrine 用。这些结果表明，MAS能够诱导猪卵母细胞体外减数分裂恢复的发生，而且其促进作用可能 是通过PKc信号通路来调节的。 试验二就MAS诱导猪卵母细胞减数分裂成熟的机制即MAS是否为FSH诱导的卵母细胞 减数分裂成熟过程中必要豹信号分子进行了研究。首先利用MAS合成酶CYP51的特异性抑制 的培养液中培养与上述相同时问后的CEOs的卵丘细胞通过WesternBlot分析MAPK的表达情 况，结果发现。RS21607部分抑制了猪卵母细胞减数分裂成熟过程中卵丘细胞中MAPK的磷酸 化。这些结果表明，FSH确实应用MAS作为下游的一个必要的信号分子来诱导猪卵母细胞减 数分裂成熟，而且MAS对卵母细胞减数分裂成熟的作用是通过激活MAPK通路而实现的。 T-MAS处理HX抑制 试验三检测了T-MAS对哺乳动物精子功能的影响。首先用a-20F,M 的猪CEOs44h后，发现其对猪卵母细胞成熟没有影响(尸0．05)。然后利用精子三重染色法 T-MAS处理1h后的猪精子发生顶体反应的百分率为24．3±0．9％ 分析得到，经10“M或20,uM T-MAS对精子顶体反应无影 及41．2±1．7％’明显较对照组高(14．2±1．2％，P0．01)。而埘M 响。同时用T-MAS代替咖啡冈体外处理猪精子后并借助于体外培养的猪卵母细胞研究了MAS 对精子受精能力的影响。以受精后卵裂率及桑椹胚的比率来作为检测猪精子受精能力的指标。 T-MAS处理组的卵裂率分别是53．3±1．9％及65．8±2．6％，明显高 结果表明，lo“M或20,uM 于对照组的卵裂率(16．615．8％，P0．01)；而且其对应的桑椹胚比率都显著高于对照组(尸 0．01)。利用RT-PCR，我们未检测到精子自身表达CYP51基因。但通过组织学方法对精子体内 获能的部位输卵管进行CYP51蛋向的检测后发现，CYP51蛋白在卵泡期及黄体期的猪输卵管 有广泛的表达。所有的结果提示我们，体外T．MAS可诱导猪精子项体反应及提高其受精能力： 在体内，猪输卵管中表达的CYP51蛋白介导的T-MAS可能参与了精子顶体反应和受精能力的 调节。 综上所述，本论文的研究结果可以清楚地表明，MAS作为FSH下游的一个必要的信号分 子，可诱导猪卵母细胞体外减数分裂的恢复及第一次减数分裂成熟，该作用是通过PKC及 MAPK信号通路的激活而实现的；同时T-MAS可促进猪精子受精能力的提高，可能作为体内 一个生理性诱导因子而起作用。 关键词：促减数分裂甾醇，卵泡刺激素．卵母细胞减数分裂，信号通路，精子 ll Abstract Meiosis FF—MASand werederived ActivatingSterols(MAS)includeBMAs，which separately fromhuman follicu