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IL-10对体外培养乙肝患者树突状细胞作用探究
IL-10对体外培养乙肝患者树突状细胞作用探究【摘要】目的:研究IL-10对慢性乙型重型肝炎患者树突状细胞的作用。方法:抽取受试慢性乙型重型肝炎患者外周静脉血,分离提取外周血淋巴细胞,分别采用HBcAg、rhIL-4、rhGM-CSF刺激培养获得不同分化的树突状细胞,用不同剂量的IL-10刺激培养树突状细胞,检测各组树突状细胞表型与分泌的细胞因子及体外诱导的淋巴细胞毒活性的变化。结果:IL-10处理的树突状细胞膜具备低表达HLA-DR,CD83,CD86分子,低分泌IFN-γ,IL-12p70的特点,体外诱导减弱自体淋巴细胞毒活性,与DC比较结果具有显著性差异(P
1.2.2 树突状细胞表型的测定:树突状细胞用PBS洗2次,每个检测取5×105个细胞,分别加入FITC/PE标记的CD86、CD83、HLA-DR单抗15μl,混匀后于4℃放置30 min,再用含1%牛血清白蛋白的PBS洗2次,然后用流式细胞仪测定细胞表面CD86、CD83、HLA-DR分子的表达情况。
1.2.3 IFN-γ和IL-12p70的ELISA检测: 按试剂盒说明书介绍的方法,采用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组上清液中IFN-γ和IL-12p70含量。
1.2.4 DC体外诱导的淋巴细胞毒活性检测:在第8天分别将各组的DC与自体悬浮淋巴细胞混合,以含hIL-2(100U/mL)的RPMI-1640培养液培养,收集共培养5d的淋巴细胞作为效应细胞。取HepG2细胞,按40:1的效靶比加入效应细胞,按实验孔、DC最大释放孔、DC与淋巴细胞自然释放孔、背景及体积对照孔各设三个复孔,共同培养4h,按CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒说明,检测DC体外诱导的淋巴细胞毒活性。
1.2.5 统计学处理:采用SPSS11.5统计软件包对数据进行分析,结果以x±s表示,各组及组间比较用t检验,P
参考文献?
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