湖南农大分子检测复习题答案.docVIP

检验检测技术复习题 名词解释 聚合酶链式反应（PCR） ；是1985年由Mullis等人创立的一种在引物指导下由酶催化的对特定克隆或基因组DNA序列进行的体外扩增反应。 变性；加热至94℃左右，双链DNA解离成单链； 退火 ；模板DNA与人工合成的一对引物在适合的温度下分别与变性后的模板DNA在需要扩增区域的两翼进行准确互补配对结合而形成双链螺旋结构的过程。 延伸；Extension是指变性退火引物与模板DNA 结合后，在适当的条件下（温度一般为70-75℃），以四种dNTP为材料，通过DNA 聚合酶的作用，单核苷酸从引物的3末端掺入，沿模板按引物5-3方向不断延伸合成新股DNA链。 Plateau Effect； 平台效应，PCR反应中，靶DNA片段的扩增最初表现为直线上升，随着靶DNA片段的逐渐积累，当引物:模板:DNA:聚合酶达到一定比值时，酶的促化反应趋于饱和，此时靶DNA产物浓度不再增加，即出现所谓平台效应。 Primer； restriction；限制作用，细菌细胞分解外源DNA，从而限制其在胞内存在的作用。 Plasmid ；质粒，一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，以超螺旋状态存在于宿主细胞中。 Vector ；载体，把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的一种能自我复制的DNA分子。 blotting；印迹，就是将电泳分离后的琼脂糖凝胶中核酸片段转移到尼龙膜或硝酸纤维素膜上的过程，转移后核酸片段保持相对位置不变。 佐剂Avidity；亲合力，抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度 核酸分子杂交；把同源关系较近的，不同生物个体来源的变性DNA或RNA单链，经退火处理形成DNA-DNA或DNA-RNA这一过程叫分子杂交 感受态细胞 ；受体细胞经过一些特殊方法(如电击法、CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂法)的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞，这种细胞称为感受态细胞。 Serologic Reaction；血清反应，指体外抗原抗体反应。因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以指体外抗原抗体反应亦称为血清反应。 固相杂交：solid-phase hybridization，是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物（如硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，另一条反应核酸链则游离在溶液中的杂交。 液相杂交：参加反应的两条核酸链（指使变性的待测核酸单链与放射笥核素标记的已知的核酸单链--探针）都游离在溶液中（保温），形成杂交复合物。 二、思考题 抗原抗体反应的四个基本特点抗原与抗体能够特异性结合这特性是由抗原与抗体分子的级结构决定的抗原与抗体能够特异性结合是基于两中分子间的结构互补性与亲和性,这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的。在实时荧光PCR反应体系中，除了含传统PCR的各种试剂外，还含荧光标记探针，目前常使用的荧光探针。这些探针都包含两个荧光基团荧光素类探针、无机离子荧光探针、荧光量子点、分子信标在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构，通常有抗原抗体反应参与促进抗原抗体间特异性结合的四种主要分子间引力有效的检测方法都应具备三个条件循环次数太多，目的片段的数目会增加，但是杂带（引物非特异性结合导致或者聚合酶活性下降导致）所占比例也会上升。DNA提取实验中用TE而不用双蒸水保存DNA的原因TE缓冲液为弱碱性,对DNA的碱基有保护，提取的DNA最好用TE缓冲液保存,其完整性不易被破坏或产生开环及断裂。 使用多克隆抗体的缺点。它是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性 在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来，可以用哪种去污剂可以使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA？ SDS十二烷基硫酸钠 1985年由Mullis等人创立了什么方法，并因此获得1993年诺贝尔化学奖？ 体外酶促扩增特异DNA片段 Taq DNA聚合酶的活性受到哪种无机的影响？哪种盐缓冲液能抑制该酶的活性，务必避免使用之？ Mg+的影响 磷酸盐 半抗原能与相应的抗体发生特异性结合反应，而它们自己不是免疫原，不能诱导抗体产生产生抗体’ 3’的聚合活性 3’5‘的外切酶活性 5’3‘外切酶活性 核酸分子杂交根据杂交反应所处的介质不同可分为哪些类型？ 在实时荧光PCR的反应体系中常使用的荧光探针探针以及它们都包含哪些荧光基 团？ RNA的类型。mRNA, rRNA,tRNA 常用的逆转录酶有哪几种？ 一种来自禽源髓细胞瘤病毒（AMV）。一种来自能表达克