整合猪瘟病毒囊膜糖蛋白假型鼠白血病病毒微量中和-畜牧兽医学报.PDF

畜牧兽医学报 ， （ ）： １５７０１５７６ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 整合猪瘟病毒囊膜糖蛋白假型鼠白血病病毒 微量中和试验的建立和初步应用 １ １ ２ １ 周 斌 ，刘 珂 ，魏建超 ，陈溥言 　 　 （ 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，南京 ； １． ２１００９５ ２．中国农业科学院上海兽医研究所，上海 ２００２４１） 摘 要：将构建的真核表达载体 、 和 分别与 假型病毒构建体系的 种 ｃＤＮＡＥ０ ｃＤＮＡＥ２ ｃＤＮＡＥ０１２ ＭｕＬＶ ２ 　 ｐ ｐ ｐ 骨架载体 和 经磷酸钙瞬时共转染 细胞， 后收集假病毒上清，超速离心后用抗 ＨＩＴ６０ ＨＩＴ１１１ ２９３Ｔ ４８ｈ ＣＳＦＶ ｐ ｐ 多抗通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现只有 Ｅ０１２蛋白能够在假病毒颗粒表面表达，说明Ｅ０１２能够整合到假型病毒粒子 表面。将此假病毒（ ）感染 、 、 、 、 、 、 和 等 种细胞， 后检 ＭｕＬＶＥ０１２ ＳＫ６ＰＫ１５ＳＴ ＢＨＫ２１ＶｅｒｏＣＯＳ７２９３Ｔ ＣＥＦ ８ ４８ｈ 测发现只有在 、 和 等猪源细胞中标记基因 能有效表达，表明所构建的假病毒具有感染性，只能 ＳＫ６ＰＫ１５ ＳＴ 犔犪犮犣 感染猪源细胞，进一步证实了猪瘟病毒对猪的单一嗜性，并且感染性与 ＮＨＣｌ浓度存在极显著的线性负相关性， ４ 结果表明猪瘟病毒进入宿主细胞的过程有 ｐＨ依赖性。将假病毒 ＭｕＬＶＥ０１２代替强毒 Ｓｈｉｍｅｎ株与标准阴性、阳 性血清和倍比稀释的待检血清混合后感染 ＰＫ１５细胞，建立了微量中和试验，与全病毒微量中和试验进行了比较， 结果表明所建立的方法能够代替强毒进行血清中和试验，检测临床血清的猪瘟病毒抗体中和效价。 关键词：猪瘟病毒；囊膜糖蛋白；鼠白血病病毒；假病毒；感染性；微量中和试验 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６１ Ａ ０３６６６９６４２０１１１１１５７００７ 　　　　 　　　　 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋犪狀犱犘狉犲犾犻犿犻狀犪狉犃 犾犻犮犪狋犻狅狀狅犳犆犾犪狊狊犻犮犪犾犛狑犻狀犲犉犲狏犲狉犞犻狉狌狊 狔 狆狆 犘狊犲狌犱狅狏犻狉犻狅狀狊犕犻犮狉狅狀犲狌狋狉犪犾犻狕犪狋犻狅狀犃狊狊犪 狔 １ １ ２ １ ，