试验四抗坏血酸含量的测定.PDF

实验四 抗坏血酸含量的测定 生化工程教研室 王艳敏 基础医学楼A区四楼 A404办公室 电话 几百年前的欧洲，长期在海上 航行的水手经常遭受一种疾病的折 磨，患者常常全身乏力，精神抑郁 、虚弱、厌食、营养不良，面色苍 白，牙龈出血，甚至皮肤淤血和渗 血，最后痛苦地死去，人们一直查 不出病因。奇怪的是，只要船只靠 岸，这种疾病很快就不治而愈了。 一、实验目的 1、学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。 2、熟悉微量滴定法的基本操作技术。 二、实验原理 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺 少时会产生坏血病，故又称抗坏血酸。它对物质代 谢的调节具有重要作用。 近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并 具有对化学致癌物的阻断作用。 抗坏血酸是一种不饱和多羟基内酯化合物，稍 有酸味的糖类白色晶体，是水溶性维生素，分布广 ， 新鲜水果、蔬菜中的含量丰富。 测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工 工艺成效的重要指标。  抗坏血酸具有强的还原性，能将染料2、6一二氯酚靛酚 还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。  氧化性2 ，6一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色 ，在中 性或碱性溶液中呈蓝色 ，当用此染料滴定含有抗坏血酸的 酸性溶液时，染料立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏 血酸全部被氧化时，则染料立即使溶液显示粉红色 ，此时 为滴定终点。从滴定时染料标准液的消耗量（ml ），可以 计算出被检物质中抗坏血酸的含量。 三、材料、试剂与器具 （一）材料：新鲜的水果（柑橘） （二）器具：  天平  研钵  碱式滴定管  三角瓶、量筒、移液管、容量瓶 （三）试剂： 1、标准抗坏血酸溶液(0.1mg/ml) ：准确称取50mg抗坏血酸，用 1%的草酸溶液溶解定容至500ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最 好临用时配制。 2、1%草酸溶液 ：1g草酸溶于100ml蒸馏水中。 3、2%草酸溶液 ：2g 草酸溶于100ml蒸馏水中。 4、0.05% 2,6一二氯酚靛溶液 ：取500mg 2,6一二氯酚靛于300ml 含有104 mg NaHCO 的热水中，冷却后加水稀释至1000ml ， 3 滤去不溶物，贮棕色瓶内。（4℃约可保存1周）每次临用时 以标准抗坏血酸溶液标定。 四、操作步骤  （一）提取 1. 取新鲜水果5g左右 ，加2%的草酸8ml ，置研钵中 研成浆。 2. 将匀浆液转移至15 ml的离心管中，4000r/min, 离心5min。上清液用滤纸过滤至50 ml的三角瓶中。 3.将滤液置入50ml的容量瓶内，用2%草酸定容并混 匀，备用。  （二）标准液的标定 量取1ml标准抗坏血酸溶液置于50ml锥形瓶中， 加4ml 1%草酸，用0.05% 2 ，6-二氯酚靛酚滴定至 淡红色 ，（15s内不褪色即为终点 ）。 记录所用染料溶液的体积（ml ），计算出1ml 染料溶液所能氧化抗坏血酸的量（mg ）记做T.  计算: T= C ×V1 ／V2 式中 T: 1ml染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数，mg/ml C ：抗坏血酸的浓度，mg/ml ； V1 －抗坏血酸标准溶液的体积，ml V2 －消耗2 ，6-二氯酚靛酚的体积，ml 1ml 染料相当于 ？抗坏血酸  （三）样品的测定： 分别吸取滤液10 ml两份，各放入50 ml三角瓶 中，立即用0.05% 2 ，6-二氯酚靛酚溶液滴定至出 现明显的粉红色在15 s内不消失为止。记录所用滴定 液体积。 整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min ，记录两 次滴定所得的结果，求平均值。 五、结果计算 维生素C含量（mg/100g样品）=