间接ELISA 法测定转基因小鼠血清中核糖核酸酶 - 大连医科大学学报.PDF

第 28 卷第 6 期 大连医科大学学报 Vol.28 No.6 2006 年 12 月 Joumal of DaUan Medical Universi句 Dec .2006 间接 ELISA 法测定转基因小鼠血清中 核糖核酸酶抑制因子的表达 刘宇刘基巍2 崔秀云3 燕秋3 (1.大连市第三人民医院肿瘤科，辽宁大连 116033; 2. 大连医科大学第一临床学院肿瘤科，辽宁大连 116011; 3. 大连医科大学生化和 分子生物学教研室，辽宁大连 116027) 摘要: [目的]建立间接 ELISA 法测定血清中核糖核酸酶抑制因子(ribonucle耐inhibitor ， RI)含量的方法，并测定在 转 RI 基因小鼠血清中 RI 的表达情况。[方法]用血清样品包被酶标板，兔抗人 RI 抗体为一抗，辣根过氧化物酶 标记的羊抗兔IgG 为二抗，建立血清 RI 定量检测的间接ELISA 法:取转染了 RI 基因的小鼠的血清，用上述建立的 间接ELlSA 法测定不同时相小鼠血清中 RI 的表达水平。[结果]定量检测血清 RI 的间接ELISA 法最适反应条件 为一抗最佳稀释度为 1 :4000 ，二抗的最佳稀释浓度为 1 :2∞0。转基因小鼠第二3 周血清中 RI 含量较低(0.556 :1: 0.080) ， 1 个月左右达到最高值(0 . 836 :1: o. 113) ,3 个月时明显下降(0.640 :1: 0.100)0 [结论]间接 ELISA 法可以 用于测定血清中的 RI 抗原含量。 关键词:核糖核酸酶抑制因子;间接酶联免疫吸附试验;血管生长因子 中圈分类号:R73 - 3 文献标识码:A 文章编号: 1671-7295(2006)06 - 0450 - 04 核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor , RI)是一种 实业科华公司。包被液、封闭液、洗涤液、抗体缓冲液均为自 分子量约为 50 kD 的酸性糖蛋白[1] 可以与血管生长因子 行制备。 96 孔酶标板购自美国 Costar 公司， ELX800 酶标 (angiogenin , Ang) 紧密结合，从而阻断肿瘤新生血管形成， 仪、洗板机为美国 BIO - TEK 公司产品， PHS - 3C 型精密 pH 计由上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂生产。 有效地抑制肿瘤的生长。目前，检测 RI 最常用的方法是免 疫印迹，该方法只能用于半定量测定，且操作复杂、费时。本 1. 2 方法 1.2.1 间接 ELlSA 法检测血清中 RI 含量:取血清样品用 试验旨在建立稳定、特异的间接 ELISA 法，定量检测和分析 包被液稀释不同浓度(1 :25 、 1 :50 、 1: 100) 后，取 50μL 加入 血清中 RI 的表达水平，并用所建立的间接 ELISA 法对转 RI 基因小鼠不同时相血清中町的含量进行检测，分析 RI 基因 到酶标板各孔中，每个样品包被6 孔，4C过夜。用洗板机洗 5 次后，每孔各加封闭掖 100 阵，37 t:孵育1. 5h。洗板机洗 表达的动态变化趋势。 板后，每个样品中取 3 孔加入用抗体缓冲液稀释4 000 倍的 1 材料和方法 一抗 50 阵，作为反应孔，其他 3 孔只加抗体缓冲液 50 阵， 1. 1 材料