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揭秘化妆品安全性评价技术(十一) 通常消费化妆品无需担心生殖和发育毒性的问题，但是近年来塑化剂、双酚A等具有潜在生殖毒性的化合物引起的安全事件频繁发生，使消费者对于长期使用化妆品的安全性越来越担忧。一方面是化妆品质量参差不齐，消费者担心各种非法添加和禁限用物质的超标使用，另一方面，受制于传统评估方法的局限，人们对大量新化合物的长期慢性毒性根本来不及评估，因认识不足而加剧这种担扰。因此，开发低成本高通量新的体外方法并与体内动物实验整合运用可提高化妆品原料生殖与发育毒性的安全性评估与科学认知。 生殖是使种族延续的各种生理过程的总称，包括配子（精子与卵子）发生、交配、卵细胞受精、着床、胚胎形成与发育、胎仔发育、分娩和哺乳等阶段。生殖毒性指的是一种物质在繁殖周期的任何一个阶段中所产生的毒副作用，既包括外源物质对亲代生殖功能的影响，也包括对子代发育过程的有害影响。如今年以来愈演愈烈的塑化剂事件，导致危机的邻苯二甲酸酯类就属于对生殖发育的各个阶段均有可能产生危害瓦特的一类化合物。研究表明邻苯二甲酸酯类在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，可干扰内分泌，影响男性生殖系统的功能，严重的会导致睾丸癌。动物实验表现为肾脏和睾丸重量减轻、流产、胚囊植入率降低、多脏器发育畸形。邻苯二甲酸酯类普遍存在于化妆品中，指甲油的邻苯二甲酸酯含量最高，很多化妆品的芳香成分也含有该物质。化妆品中的这种物质会通过女性的呼吸系统和皮肤进入体内，如果过多使用，会增加女性患乳腺癌的几率，还会危害到她们未来生育的男婴的生殖系统。因此，日化工业的高速发展不能忽视可能日趋严重的生殖和发育毒性危害。 生殖毒性的动物实验 化学物的生殖发育毒性有两个显著的特点：一是生殖系统较机体的其他系统对化学物的毒作用更为敏感，二是损害作用不仅影响接触化学物质的母体本身，还可影响其后代。鉴于哺乳类动物繁殖过程的复杂性，对繁殖过程的各个方面进行毒理学分析都是必须的，包括致畸性、内分泌干扰、母细胞突变、生育受损等。为了检测化学物质对生殖周期内不同靶细胞/器官的毒副作用，OECD发布了8个试验指导，这些指南大多数是动物实验方法。2009年OECD认可了TG 455（雌二醇受体转录试验），这是首个发布的生殖毒性试验替代方法。还有3项体外试验方法已完成验证，进入法规认可程序。发育和生殖毒性的试验标准还见于美国试验和材料学会（ASTM）、美国环保局（USEPA）等的方法指南中。 传统的生殖毒性检测以动物试验为主，包括分娩前发育毒性研究（OECD TG 414）、一代动物毒性研究（OECD TG 415）、二代动物毒性研究（OECD TG 416）、生殖毒性/发育毒性筛选检测（OECD TG421）、重复剂量毒性研究结合生殖毒性/发育毒性筛选检测（OECD TG 422），以及2009年发布的Hershberger试验（TG411）和目前正在讨论中的发育神经毒性试验（TG426）。我国列入各类商品（药品、食品、药妆品、化学品）毒性测试指南的标准方法均来源于OECD。完整的生殖毒性研究应包括成年动物从受孕到子代性成熟的各个发育阶段接触受试物的反应。测试时间应连续通过一个完整的生命周期，即从亲代受孕到子一代受孕。最常用的三段生殖毒性试验由生育力和早期胚胎发育毒性试验、胚体—胎体毒性试验（致畸试验）和出生前后发育毒性试验（围产期毒性试验）三部分组成。对于人类反复接触的化学物，如食品添加剂、农药、环境污染物及某些化妆品原料等，仅做三段生殖毒性试验是不够的，应进行多代生殖试验。 2008年OECD提出了一项新的试验指南，称为延长一代生殖毒性研究，用于代替一代和二代动物毒性研究（OECD 415，416）以及其它特定发育毒性研究（OECD 426，414）。试验设计体现了3R法规的要求，更加灵活和有效，优化了实验过程和检测指标，增加了发育神经毒性和免疫毒性的评价，减少了动物使用。 体外替代方法的研究策略 鉴于哺乳类动物繁殖过程的复杂性，试图通过体外系统模拟整个繁殖周期来检测某种化合物的生殖毒性还不可能。因此，将整个繁殖过程分成数个连续的生物学部分，分别对其进行单独或联合研究，可最大化鉴定出某种物质的靶细胞、组织或器官。根据这一思路，已建立了许多有前景的体外模型和方法。例如内分泌干扰物的筛查方法、报告基因检测方法、计算机辅助精子检测方法等。这些体外方法的组合应用有助于生殖毒性的安全性评价和机制研究。 1. 雄性和雌性繁殖力和受精方面 目前研发的方法覆盖了许多毒性作用终点，如睾丸支持细胞和生精细胞毒性，卵泡发生（FBA检测），生殖细胞成熟，精子运动性和形态学（CASA检测），精子DNA损伤（ReProComet检测），甾体生成（FBA和粒层细胞检测），内分泌系统干扰