高效液相色谱法测定酵母中麦角固醇含量.PDF

《生物工程进展》2000 ,Vol . 20 ,No . 4 高效液相色谱法测定酵母中麦角固醇含量 谢和金 　卢 　毅 　邱咏梅 (江西赣南制药厂 赣南 　3 14000) 肖　毅 ( 吉林省妇幼保健院 长春 　13002 1) 郭建强 　褚明辉 　孙淑兰 ( 中科院长春光学精密机械与物理研究所 长春 　13002 1) 摘要 　本文建立了酵母中麦角固醇含量高效液相色谱测定方法 。其色谱条件为 ,色谱柱 H Y Per sil ( ) BD S C18 5u 反相柱 ,流动相为甲醇 :水 97 ∶3 ,紫外检测波长为 283nm 。酵母样加碱乙醇皂化 、提 取 、洗涤 、蒸干 、定量测定 。结果表明:标准曲线范围是 002 —08mg/ ml 线性 良好 , 最低限量为 00 1mg/ ml ; 日内及 日间 R SD (n = 4) 分别在 2 1～4 0 %和 2 4 ～4 8 % , 回收率为 960 ～980 % 。 本方法操作简便 、准确 、可靠 。 关键词 　麦角固醇 　酵母 　高效液相色谱 　含量测定 50ml 容量瓶中 ,待测 。 1 　引言 3 　结果和讨论 　　麦角固醇是化学合成维生素 D2 的前体 ,大量 地存在于酵母细胞中 ,是酵母中最重要的甾体化合 在上述提取条件和色谱条件下 ,麦角固醇的色 物 。目前 ,世界上工业生产所需的麦角固醇几乎全 谱峰与酵母提取物中杂质峰有很好的分离 ,见图 1 。 部是从酵母中提取获得 。因此 ,研究建立简便 、准 确 、可靠的酵母中麦角固酵含量测定方法 ,对研究高 含量麦角固醇酵母的发酵生产工艺 ,及研究从酵母 中提取麦角固醇的生产工艺具有十分重要的意义 。 2 　材料与方法 2 1 仪器 : 高效液相色谱仪 Water s 5 15HPL C Pump , Rheodyne7725i 进 样 器 , 486 紫 外检 测 器 , HSP 色谱工作站 ,旋转蒸发器 。 ( ) ( ) 2 2 试剂 : 甲醇 色谱级 ,双蒸水 自制 乙醇和 ( 图 1 　( 注 :麦角固醇保留时间为 31220min) 正庚烷为分析纯 ,麦角固醇对照品 日本住友公司生 产) 　　31 标准曲线 :精密度称取 100mg 麦角固醇对 2 3 色谱条件 :色谱柱 H YPer sil BD S C18 5u ;流 照品 ,用无水乙醇溶解并稀至刻度 ,作标准贮备液 。 ( ) 动相 甲醇 —水 97 ∶3 ; 流速 18ml/ min ; 检测波长 用标准贮备液分别配制 002m g/ ml , 004mg/ ml , 283nm ;灵敏度 002AU F S ; 衰减 = 5 。采用外标法 01mg/ ml ,02mg/ ml ,0 . 4mg/ ml ,0 . 8mg/ ml 六份标 按峰面积进行定量 。