双尾彗星实验检测精子DNA完整性的方法学建立.PDF

检验医学２０１２年１月第２７卷第１期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊａｎｕａｒｙ２０１２，Ｖｏｌ２７．Ｎｏ１． ·２１· 文章编号：１６７３８６４０（２０１２）０１００２１０５　　　中图分类号：Ｒ４４６．１１　　　文献标志码：Ａ 双尾彗星实验检测精子ＤＮＡ完整性的方法学建立 １ １ ２ 陈建伟 ，　张晓霞 ，　崔　云 （１．宁波市中医院检验科，浙江 宁波３１５０１２；２．宁波市中医院男科，浙江 宁波３１５０１２） 　　摘要：目的　建立双尾彗星实验检测精子ＤＮＡ完整性的方法学，并分析精子ＤＮＡ损伤的类型。方法　利 用中性和碱性双相单细胞凝胶电泳技术检测精子 ＤＮＡ损伤的情况。结果　双尾彗星实验共得到９种彗星形 态，分别代表９种精子ＤＮＡ损伤类型。利用 ＨＯ和限制性内切酶ＡｌｕＩ分别诱导单链 ＤＮＡ和双链 ＤＮＡ的产 ２ ２ 生。随着ＨＯ浓度逐渐增加，单链ＤＮＡ的断裂逐渐增多，显微镜下可见含Ｙ轴彗星尾的精子数逐渐增多，差异 ２ ２ 有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。同样，随着ＡｌｕＩ消化时间的延长，双链 ＤＮＡ的断裂增多，显微镜下可见含Ｘ轴彗星 尾的精子数增多，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。另外，我们还发现男性不育组和有正常生育能力组的ＤＮＡ单 链损伤碎片指数（ＳＳＢＤＦＩ）差异无统计学意义，而男性不育组的ＤＮＡ双链损伤碎片指数（ＤＳＢＤＦＩ）却显著高于 正常生育能力组（Ｐ＜０．０５）。结论　双尾彗星实验能够区分精子ＤＮＡ损伤是单链损伤还是双链损伤，为评估 男性的生育能力提供更加深入、有力的实验室依据。 关键词：双尾彗星实验；ＳＳＢ；ＤＳＢ；男性不育 １ 　　ＭｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｔｗｏｔａｉｌｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｆｏｒｓｐｅｒｍＤＮＡｉｎｔｅｇｒｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ＣＨＥＮＪｉａｎｗｅｉ， １ ２ ＺＨＡＮＧＸｉａｏｘｉａ，ＣＵＩＹｕｎ．　（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｉｎｇｂｏＭｕｎｉｃｉｐａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＮｉｎｇｂｏ３１５０１２，Ｃｈｉｎａ；２．ＭａｌｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＮｉｎｇｂｏＭｕｎｉｃｉｐａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＮｉｎｇｂｏ３１５０１２，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｗｏｔａｉｌｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｆｏｒｓｐｅｒｍＤＮＡｉｎｔｅｇｒｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｔｈｅｔｙｐｅｏｆｓｐｅｒｍＤＮＡｄａｍａｇｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅｎｅｕｔｒａｌａｎｄａｌｋａｌｉｎｅｔｗｏｐｈａｓｅｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｓｐｅｒｍＤＮＡｄａｍａｇｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ａｆｔｅｒｔｈｅｔｗｏｔａｉｌｅｄｃｏｍｅｔａｓｓａｙ，９ｋｉｎｄｓｏｆｃｏｍｅｔｆｏｒｍｓｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｗｈｉｃｈｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｔｈｅ９ｋｉｎｄｓｏｆｓｐｅｒｍＤＮＡｄａｍａｇｅｔｙｐｅｓ．ＨＯ ａｎｄＡｌｕＩｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓｗｅｒｅ ２ ２ ｕｓｅｄｔｏｉｎｄｕｃｅｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄＤＮＡａｎｄｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄＤＮＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ．ＷｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＨＯ，ｔｈｅ