四膜虫彗星试验在环境水质检测中的应用-食品安全快速检测网.PDF

维普资讯 四膜虫彗星实验在环境水质检测中的应用 王丽 ，等 四膜虫彗星实验在环境水质检测中的应用 王丽， 鲁志松， 丁书茂，杨旭 (华中师范大学生命科学学院环境科学实验室，武汉 430079) 摘 要：介绍四膜虫作为生物材料在彗星实验水质检测中的应用，探讨了将单细胞原生生物应用于彗星实验在环境水质检测、遗传 毒性检测等方面的应用优势和发展前景。研究结果表明：过氧化氢浓度与细胞损伤之间呈现 良好的剂量一效应关系，东湖水和长江水末 造成四膜虫DNA的损伤，印染厂污水对细胞有严重的损伤作用，可能会影响正常的生态环境。 关键词：分子生物学； 彗星实验； 原生生物； 四膜虫； 水质检测 中图分类号：X830．2 文献标识码：A 文章编号：1003--6504(2006)05--0031-03 四膜虫是一种真核单细胞原生动物，由于其生长 技大学同济医学院提供。 迅速 ，生活周期短，取材容易，培养方法简单 ，目前 长江水采集于武汉市中华路码头；东湖水采样于 已作为标准检测生物被广泛应用于毒性检测、细胞 武汉东湖风景区；污水采集于武汉某印染厂排放污 凋亡和水质检测中。彗星实验 (cometassay)，又称 水。分别采样于2004年6月 12～14日，静置 1d将泥 单细胞凝胶 电泳 (singlecellgelelectrophoresis， 沙沉降后用于彗星实验。 SCGE)是由Ostling等u在 1984年提出，后经 Singh 1．3 实验方案 等 进一步完善的一种快速 、敏感、经济的检测单个 1．3．1 四膜虫的培养 细胞DNA损伤的技术。目前，该技术已被广泛应用 将四膜虫接种于培养液(15g蛋白胨 ，5g酵母粉， 于放射生物学、遗传毒理学、DNA损伤与修复的检 1g葡萄糖溶于1000mL双蒸水)中，在30℃条件下培 测、细胞凋亡机制的研究等诸多领域㈣，并得到不断 养72h。实验前，让四膜虫培养液在3500rm／in的条件 的发展。其基本原理是细胞经裂解液破坏细胞膜， 下离心20min，使之沉降。弃去上清液，将沉淀重悬浮 溶解蛋白质 、RNA等成分，暴露 DNA；然后在碱性 为原培养液体积的1／10。 条件下，DNA解螺旋 ，DNA的断链被释放，在电场 1．3。2 HO对四膜虫的损伤作用 的作用下，断链移向正极，从而形成彗星状影像。故 取1．3．1节制备的四膜虫细胞悬液分装于4支 在理论上彗星实验可用于真核细胞DNA损伤情况 1。5mL的离心管中，其中3支依次加入终浓度为 的分析41『。 100，200，500mol／L的H202溶液 ，在常温下染毒30rain。 本研究对传统的彗星实验方法加以改进，将其运 同时设一阴性对照组。 用于四膜虫中，以标准断裂剂过氧化氢作为阳性对照 染毒结束后进行彗星实验。在完全磨毛的载玻片 组，用不同来源的水质处理四膜虫 ，进行了以下研究。 (75mmx25mm)上铺第一层 1801,LL质量分数为 1％的 正常熔点的琼脂糖 (NMA)，厚约 1。5mm；待其凝固 1 材料与方法 后，铺第二层 100txL质量分数为0。8％的低熔点琼脂 1。1 仪器与主要试剂 糖(LMA)和细胞悬液的混合液(两者体积比为5：3)； 80—2型离心沉淀机(上海手术器械厂)；DYY一11I 第二层凝胶固化后，铺第三层质量分数为0．5％的低熔 7B型