金乌贼肌肉中三甲胺脱甲基酶的分离纯化及酶学性质.PDF

第41 卷 第 6 期 水 产 学 报 Vol. 41, No. 6 2017 年 6 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA June, 2017 文章编号: 1000-0615(2017)06-0845-09 DOI: 10.11964/jfc.20161210642 金乌贼肌肉中三甲胺脱甲基酶的分离纯化及酶学性质 金 洋， 薛张芝， 张洪超， 宋正规， 朱仁义， 步婷婷， 李和生* (宁波大学海洋学院，浙江 宁波 315211) 摘要：为了提取纯化金乌贼肌肉中的三甲胺脱甲基酶(TMAOase) ，本研究采用含有0.1 mol/L NaCl 、pH 7.0 、浓度为20 mmol/L 的三羟甲基氨基甲烷(Tris)-醋酸缓冲液提取粗酶液，经 透析、浓缩处理后，通过DEAE-52 阴离子交换柱层析和Sephacryl S-300柱层析得到了纯化 的TMAOase ，并对其酶学性质进行了研究。结果显示，经Sephacryl S-300柱层析的 TMAOase相比粗酶纯化了209.54倍；粗酶和纯化酶的最适温度分别为55和50 °C ，当温度 高于最适温度时，酶活性开始出现显著下降，粗酶在80 °C仍残留21.9% 的活性；而纯化酶 在80 °C 时，几乎检测不到酶活；粗酶和纯化酶的最适pH 均为7.0 ，中性条件下表现稳定， 在酸性和碱性条件下稳定性下降，pH 为9.0 时，粗酶残留60.7% 的活性，而纯化酶的活性 仅为20.5% 。以双倒数作图法(Lineweaver-Burk法)测得纯化的TMAOase 的Km值为22.8 mmol/L ； 经SDS电泳分析，测得其分子量为21.3 ku ；在化学物质中，柠檬酸和CaCl 对酶活 2 性具有显著的促进作用，H O 和Na S对TMAOase活性有显著抑制作用。 2 2 2 关键词: 金乌贼；肌肉；三甲胺脱甲基酶；纯化；酶学性质 中图分类号: S 912 ；TS 254.1 文献标志码: A 金乌贼(Sepia esculenta)又名墨鱼，乌鱼，主 发生变化。以往研究表明，该酶主要分布在如 要分布于东亚海域。金乌贼的全球年产量在所 茎柔鱼(Dosidicus gigas)等鱿鱼或墨鱼的肝脏、脾 [4] [5] 有乌贼中高居第2位，是我国北方海域经济价值 脏和红肌中 ，在白肌 中很少；但国外研究发 [ 1] [6] 最大的乌贼 ，与大黄鱼(Larimichthys