布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量犘犆犚检测方法-畜牧兽医学报.PDF

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１０４１８ １０１２１０１７ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量犘犆犚 检测方法的建立与初步应用  孟 茹，陈创夫 ，张 辉，乔 军，任 艳，王正荣，蒋 松 　 　 　 　 　 （石河子大学动物科技学院，石河子 ８３２００３） 摘 要：本试验旨在利用二重实时荧光定量 ＰＣＲ技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏 　 杆菌 、 、 、 、 和结核杆菌 基因的最佳引物组合，建立二重实时定量 鉴别 狅犿 １０狅犿 １９狅犿 １７狅犿 ２５狅犿 ３１ 犮 １０ ＰＣＲ 狆 狆 狆 狆 狆 犳狆 诊断方法，对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验，并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的 狅犿 ２５基因与结核杆菌犮 １０基因引物组合最佳，该二重实时荧光定量ＰＣＲ方法中布氏杆菌Ｔｍ值为８８ ８９℃， 狆 犳狆 ～ 结核杆菌 Ｔｍ值为 ９０ ９１℃，对其他供试的菌株则为阴性；该方法对布氏杆菌的 ＤＮＡ最低检出量为 ２０ ～ 拷贝 · －１，结核杆菌为 拷贝 · －１，两病原都存在时为 拷贝 · －１，比常规 高 倍。利用所建立的 μＬ ５０ μＬ １００ μＬ ＰＣＲ １００ 二重荧光定量 方法及常规 ，对 份结核痰样、 份布氏杆菌基因粗提物及 份模拟奶样进行检测，符合 ＰＣＲ ＰＣＲ ２４ １１ ３０ 率为 １００％。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌，并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。 关键词：布氏杆菌；结核杆菌；二重实时荧光定量 ＰＣＲ 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６１４ Ｓ８５２．６１８ Ａ ０３６６６９６４２０１００８１０１２０６ 　　　　 　　　　 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋犪狀犱犐狀犻狋犻犪犾犝狋犻犾犻狕犪狋犻狅狀狅犳犪犇狌犾犲狓犚犲犪犾狋犻犿犲犉犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲 狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲 狆 犙 犘犆犚犃狊狊犪 犳狅狉犇犲狋犲犮狋犻狀 犅狉狌犮犲犾犾犪犪狀犱犕 犮狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌犫犲狉犮狌犾狅狊 狔 犵 狔  ， ， ， ， ＭＥＮＧＲｕ ＣＨＥＮＣｈｕａｎｆｕ ＺＨＡＮＧＨｕｉＱＩＡＯＪｕｎ ｇ ， ， ＲＥＮＹａｎ ＷＡＮＧＺ