试验一植物根系活力的测定-地理科学学院-福建师范大学.DOC

植物生理学 实验指导书 指导老师 马红亮 福建师范大学地理科学学院生态系 实验一 植物根系活力的测定α-萘胺氧化法 植物根系的作用，主要有(1)对地上部的支持和固定；(2)物质的贮藏；(3)对水分和盐类的吸收；(4)合成氨基酸、激素等物质。因此根系的活力是植物生长的重要生理指标之一。 一实验目的 通过实验，掌握用α－萘胺法测定植物根系活力的原理和技术。 二原理 植物的根系能氧化吸附在根表面的α─萘胺，生成红色的α—羟基—1—萘胺，沉淀于有氧化力的根表面，使这部分根染成红色，其反应如下： 根对α萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切关系。日本人相见、松中等认为α萘胺氧化的本质就是过氧化物酶的催化作用，该酶的活力愈强，对α—萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。所以，可根据染色深浅定性地判断根的活力；也可测定溶液中未被氧化的α萘胺量，α-萘胺量确定根系活力的大小。 在酸性环境中对氨基苯磺酸与亚硝酸盐和α萘胺作用生成红色的偶氮染料，可比色测定α萘胺含量。其反应如 三实验仪器药品 　　分光光度计，分析天平，烘箱，三角烧瓶，量筒，移液管，　　Α萘胺溶液：称10mg α萘胺，先用2ml左右的95%酒精溶解，然后加水到200ml，成50μg/ml的溶液。 0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.0（见附表2）A液： 0.mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O 27. 8g配成1000ml。 B液：0.2mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O53.65g或Na2HPO4·12H2O71.7g配成1000ml。 用时取A液ml，B液ml混合即成。　　1%对氨基苯磺酸：将1g对氨基苯磺酸溶解于100ml 30%的醋酸溶液中。 　　亚硝酸钠溶液：称10mg亚硝酸钠溶于100ml水中。 四实验操作步骤 　定量测定 　　(1) 挖出水稻植株，并用水洗净根系上的泥土，剪下它的根系，再用水洗，待洗净后用滤纸吸去根表面的水分，称根 　　2g根放在100ml三角烧瓶中。然后加50μg/ml的α—萘胺溶液与磷酸缓冲液(pH7.0)等量混合液50ml，轻轻振荡，并用玻璃棒将根全部浸入溶液中，静置10分钟。吸取2ml溶液，测定α—萘胺含量[测定方法见下面(2)]，用为试验开始时的数值。再将三角烧瓶加塞，放在25℃恒温箱中，经一定时间后，再进行测定。另外，还要用一只三角烧瓶置同样数量的溶液，但不放根，作为α—萘胺自动氧化的空白，也同样测定，求它自动氧化量的数值。 　　(2) α萘胺含量的测定 　　吸取2ml溶液，加入10ml蒸馏水，再在其中加入1%对氨基苯磺酸溶液1ml和亚硝酸钠溶液1ml，在室温中放置5分钟，待混合液变成红色，再用蒸馏水定容到2ml。在20─60分钟内进行比色。选用波长510nm，读取吸光度，查对标准曲线得相应的α─萘胺浓度。 　　从试验开始（10分钟）时的数值减去自动氧化的数值，即为溶液中所有的α萘胺量，再减去试验结束时α萘胺含量，即得试验其间为根系所氧化的α萘胺量。被氧化α的萘胺量以μg/（单位根干重·小时）表示之。因此，还应将根系烘干称其干重。 　　(3) 绘制α萘胺标准曲线 取浓度为50μg/ml的α萘胺溶液试管中配制系列溶液，加蒸馏水10ml，1%对氨基苯磺酸溶液1ml，和亚硝酸钠溶液1ml，在室温中放置5分钟，混合液即变成红色，再加蒸馏水定容到25ml，在20─60分钟内进行比色，波长为510nm，读取吸光度A），然后以A为纵坐标，α萘胺浓度为横坐标，绘制标准曲线。 五实验数据分析 根据第一次和第二次样液所测得的吸光度值，从标准曲线查出α－萘胺含量，按下公式计算α－萘胺氧化值。 [M1－M2] × 48 α－萘胺氧化总量（μg） = ————————————————— 测定时提取液用量（ml） M1：第一次取液测定值（μg）；M 2: 第二次取液测定值（μg） [C1－C2]× 48 α－萘胺自发氧化总量（μg） = ———————————————— 测定时提取液用量（ml） C1: 第一次空白测定值（μg）;C2: 第二次空白测定值（μg） 公式中：48— 测定时提取液总量（ml） α－萘胺氧化总量（μg）－ α－萘胺自发氧化量（μg） α－萘胺生物氧化强度 ＝ —————————————————————— （α－萘胺μg·g-1根·h–1） 反应时间（h）×根鲜重（g） 实验 叶绿体色素的提取分离和理化性质 一实验目的 。 二原理 三实验仪器药品 四实验操作步骤 1．叶绿体色素的提取 （1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4～5片（2g左右），洗净，擦干，