噬菌体展示肽在促进药物透过皮肤和血脑屏障中的应用.pptVIP

通过荧光闪射检测证实TD-1对胰岛素构象没有影响 TD-1对不同结构形式的胰岛素透皮效率没有多大影响。 荧光显微镜观察皮肤切片 a和e：10 μg insulin-FITC＋100 μg TD-1 b和f：10 μg insulin-FITC＋100 μg AP-1 c和g：10 μg insulin-FITC d和h：10 μg insulin-FITC＋0.5% SLA/PP 给药后2h切片观察，切片深度皮下600μm 先用TD-1处理大鼠腹部皮肤5min，清洗干净后，0 (i), 5 (j), 15 (k) or 60 (l) min给予10 μg insulin-FITC。 10 μg insulin-FITC＋100 μg TD-1 大鼠腹部给药，不同时间0 (a)、30min (b)、1h (c)、 2h(d) 、5h(e)、24(f)片观察。 将TD-1标上FITC后，应用于大鼠皮肤，行皮肤切片直接观察TD-1-FITC在皮肤的行为；对照肽SC-1-FITC（FITC-HPGARPVFPWPG） TD-1介导INS-FITC的荧光集中在毛囊，并且能够到达皮肤深层； 对照肽AP-1与生理盐水没有荧光； SLA/PP介导INS-FITC虽然有少量荧光，但主要在皮肤表面，而且分布在整个皮肤； 清洗后立即给予INS-FITC可以明显的看到绿色荧光，而60min后看不到绿色荧光； TD-1-FITC也集中在毛囊，而对照肽SC-1-FITC没有荧光； TD-1介导胰岛素透皮进入血液发挥生物学功能作用机制有可能是通过毛囊进入血液，而且这过通道是瞬间的。 TD-1携带其它大分子药物透皮 生长激素 100μg，500μg TD-1与500μg hGH协同应用于去垂体模型大鼠，均在2h左右血液hGH含量达到高峰，而对照肽AP-1没有活性。 PT-141、阿朴吗啡 噬菌体展示肽促进药物透过血脑屏障 血脑屏障 鼻脑肽的研究 选择性定位在脑部血管内皮上的多肽 血脑屏障 血脑屏障因其屏障作用，对维持正常机体中枢神经系统功能具有极其重要的作用，但在病理状态下，又有可能成为药物治疗的瓶颈。 鼻脑肽的研究 嗅神经通路 嗅黏膜上皮通路 血液循环通路 通过噬菌体文库筛选鼻脑肽 将M13噬菌体展示文库Ph.D.-c7cTM和Ph.D.-12TM经鼻腔给予后，从大脑组织回收噬菌体，经三轮筛选，获得特异性的噬菌体。 十个单克隆测序结果及同源性分析 随机挑取10个单克隆噬菌体，经扩增、测序，发现没有完全相同的插入序列。 7号单克隆噬菌体入脑的特性 剂量—梯度效应 序列特异性 组织特异性 肽（NB-101）-7号噬菌体竟争抑制 7号单克隆噬菌体入脑途径 嗅神经与脑中滴度 嗅神经免疫组化 FTTC-NB-101(肽)在嗅神经中富集效应 入脑途径：鼻—脑嗅神经通路 选择性定位在脑部血管内皮上的多肽 血管内皮细胞标志分子是一组异质性蛋白，其异质性在于不同组织器官的内皮细胞上存在组织特异性的抗原。 通过噬菌体文库筛选多肽 随筛选次数增加，单位脑重所含的噬菌体数目逐渐增加。 通过对多个噬菌体单克隆的测序，得到了六个特异的多肽序列。 备选克隆的组织分布 3个多肽在脑组织中有明显分布，是CSKTAEHTC、QLADTTHHRPWP和SWASLPVGMNSW。其中CSKTAEHTC在肾、肺分布较多，QLADTTHHRPWP在肾、肺分布较少，SWASLPVGMNSW在脑中分布远低于肺中。 备选克隆的免疫组化染色 CSKTAEHTC QLADTTHHRPWP 将体内噬菌体展示技术用于筛选能增强药物透过皮肤、血脑屏障的肽，是极具创新性的，也提供了引人注目的研究结果，揭示了一种药物（特别是大分子蛋白类）传递的新策略景。虽然此方向的研究目前处于探索阶段，还有许多问题需要进一步研究，比如展示肽作用机理的阐明，能否携带其它药物或毒物，工业化获得途径，安全性研究等方面，但它所展现出的潜力和应用前景非常值得我们继续深入地研究。 谢 谢！ * * 噬菌体展示肽在促进药物透过皮肤和血脑屏障中的应用 王 森 成都中医药大学药学院 体内噬菌体展示技术 促进药物透过皮肤屏障 促进药物透过血脑屏障 展望 主要内容 体内噬菌体展示技术 噬菌如命的噬菌体 Smith博士于1985年初建立噬菌体展示技术（Phage Display Technology，PDT）； PDT是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。 淘选（Panning）：吸附—洗脱—扩增 淘选（Panning） Ruoslahti 等于1996 年首次将噬菌体