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近红外荧光成像技术
- 定量Western Blot 的新标准
基因有限公司 李春燕
化学发光检测 近红外荧光检测
680 laser
800 laser
11/10/2012
化学发光检测 红外荧光检测
酶促化学反应,无法准确定量 信号恒定,准确定量
暗房曝光 荧光成像
膜上无法直接观察到Marker 膜上直接观察到Marker
两种蛋白检测需Strip 两种蛋白同时检测
11/10/2012
近红外荧光成像技术
• 荧光——准确定量、线性范围宽广
• 红外——背景低、信噪比高
•双色——同时检测、同时输出
荧光-准确定量
化学发光 荧光
• 动态信号-信号随时间变化 • 静态信号-信号不随时间变化
• 信号不与目标蛋白浓度成比例关系 • 信号和目标蛋白浓度成比例关系
Saturation
INTENSITY
Background
0,0 0,0
TIME TIME
High concentration / Medium concentration / Low concentration /
signal signal signal
红外荧光VS 化学发光
定量线性范围更宽
化学发光法 近红外荧光法
•近红外荧光法能检测到0.6pg的蛋白(灵敏度高)
•近红外荧光成像呈现一个很好的线性(定量准确)
Moose Imaging –Signal/Background
Background
High S/B
Low S/B
近红外:低背景,高信噪比
近红外荧光的波长范围在700-800 nm之间,避开了NC膜、PVDF
膜微孔板等耗材的本底信号,提高了检测的信噪比和相对灵敏度
11/10/2012
红外荧光-直接检测
Infrared dye (IRD800, Alexa680)
膜上抗原 一抗结合 红外标记的二抗
Odyssey直接扫描
不需要底物
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