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克隆 技 术 介 绍张 勋 学号：160820216摘 要 克隆技术是生命科学技术领域里非常重要的部分，随着新时代的到来，克隆技术在人类生产生活中将发挥更加重要的作用。人们享受着克隆技术带来的巨大好处，但与此同时，克隆技术对人类的可持续发展也提出了问题和挑战。本文是通过从实质、方法、应用价值等方面对克隆技术进行一些介绍。一、克隆技术实质1963 年J.B.S.Haldane在题为“人类种族在未来二万年的生物可能性”的演讲上采用“克隆 ?(Clone)”的术语。学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫“克隆”，这门生物技术叫“克隆技术”，其本身的含义是无性繁殖，即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系，该细胞系中每个细胞的基因彼此相同。早在1938年，德国胚胎学家Speman最早提出克隆设想。1962年，英国剑桥大学的Gurdon进行了青蛙胚胎核移植，获得成年蛙。在经历半个多世纪的研究后，终于在1996年的7月5日，在苏格兰罗斯林研究所中，随着用体细胞克隆出来的小羊多莉的诞生，哺乳动物克隆技术真正的来到我们面前。克隆技术作为人类在生物科学领域取得的一项重大技术突破，反映了细胞核分化技术、细胞培养和控制技术的进步，它对于扩大良种动物群体，提高畜群的遗传素质和生产能力，拯救濒危动物等的方面而言是迄今为止最为理想手段。克隆也可以理解为复制，就是从原型中产生出同样的复制品，它的外表及遗传基因与原型完全相同，但大多行为 思想不同。时至今日，“克隆”的含义已不仅仅是“无性繁殖”，凡是来自同一个祖先，无性繁殖出的一群个体，也叫“克隆”。这种来自同一个祖先的无性繁殖的后代群体也叫“无性繁殖系”，简称无性系。简单讲就是一种人工诱导的无性繁殖方式。但克隆与无性繁殖是不同的。克隆是指人工操作动物繁殖的过程，无性繁殖是指：不经过两性生殖细胞的结合由母体直接产生新个体的生殖方式。 植物基因的克隆技术是生命科学研究的重要组成部分，是现代生命科学技术中最核心的内容，它是随着20 世纪 70 年代初 DNA 体外重组技术的发明而发展起来的， 其目标是识别和分离特异基因并获得基因完整序列，确定其在染色体上的位置，阐明其生化功能，并利用生物工程手段应用到生产实践中去。一般来讲，基因克隆的策略可分为两种途径： 正向遗传学途径和反向遗传学途径。 正向遗传学途径以待克隆的基因所表现的功能为基础， 通过鉴定基因的表达产物或表型性状进行克隆，如功能克隆和表型克隆等；反向遗传学途径则着眼于基因本身特定的序列或者在基因组中的特定位置进行克隆，如定位克隆、同源序列法克隆等；随着 DNA 测序技术和生物信息学的发展，又产生了电子克隆等新兴克隆技术。 目前，在玉米，水稻、油菜、拟南芥、烟草、番茄等多种植物中，已经克隆了许许多多与植物的产量、品质、抗性及农艺性状等相关的基因。现对在植物基因克隆过程中运用的主要技术进行综述，以把握植物基因克隆技术的发展历程，并对未来的发展趋势进行展望。二、部分克隆技术简介1、功能克隆功能克隆（Functional Cloning）就是从蛋白质的功能着手进行基因克隆， 是人类采用的第一个克隆基因的策略。其基本内容为：根据已知的生化缺陷或特征确认与该功能有关的蛋白质， 分离纯化蛋白并测定出部分氨基酸序列，根据遗传密码推测其可能的编码序列，设计相应的核苷酸探针， 杂交筛选 cDNA 文库或基因组文库，或者使用该蛋白质特异的抗体，筛选表达载体构建的 cDNA 文库， 通过抗原抗体反应寻找特异的克隆，最后对选中的克隆测序，获得目的基因的序列。2、定位克隆定位克隆技术 （positional cloning） 又叫图位克隆（map-based cloning），是根据目标基因在染色体上的位置进行基因克隆的一种方法， 适合于克隆编码产物未知的基因。 其基本原理是根据功能基因在基因组中存在相对较稳定的基因座， 在利用分子标记技术对目的基因进行精确定位的基础上， 用与目标基因两侧紧密连锁的分子标记筛选含有大的插入片段的基因组文库（如 BAC 和 YAC），用筛选到的阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群， 再通过染色体步行（chromosomewalking）逐步逼近候选区域或通过染色体登陆（chro-mosome landing）的方法获得含有目标基因的大片段克隆，将含有目标基因的大片段克隆进行亚克隆，或以大片段克隆作探针筛选 cDNA 文库； 从而将目标基因确定在一个较小的 DNA 片段上并进行序列分析，通过遗传转化和功能互补试验分析，鉴定获得目的基因。定位克隆理论上适用于一切基因， 但由于定位克隆依赖于高密度的分子标记连锁图谱， 因此该技术对于基因组较小， 重复序列少而且已经构建了高密度RFLP 或 RAPD 等标记图谱的植物无疑是非常有效的，3、转座子标签法（tra