热处理对海参溶菌酶C 端多肽的抑菌活性和结构的影响.PDFVIP

Vol.35 高等 学校 化 学 学报 No.5 2014年5月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 1044 ~1050 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 热处理对海参溶菌酶C端多肽的 抑菌活性和结构的影响 武摇 瑶,梁雯婧,李摇 成,商摇 旭,丛丽娜 (大连工业大学生物工程学院,辽宁省发酵工程重点实验室,大连 116034) 摘要摇 实验优化了重组蛋白C端多肽(SjLys鄄C)的E. coli Rosetta(DE3)pLysS表达系统,将重组质粒pET鄄32a (+)鄄SjLys鄄C转入有助于蛋白二硫键正确折叠的新表达宿主E. ColiRosetta鄄GamiB(DE3)pLysS 中. SDS鄄PAGE 分析表明,重组蛋白SjLys鄄C在宿主中得到高效可溶表达. 抑菌实验结果表明,重组蛋白SjLys鄄C具有较高的 抑菌活性;经100 益处理40 min后,蛋白SjLys鄄C的抑菌活性提高. 分子动力学(MD)模拟表明,SjLys鄄C蛋 白具有高度的热稳定性,蛋白热处理后未变性,仍维持完整的三级结构. 但在热处理过程中,SjLys鄄C多肽的 氨基酸残基随温度变化发生内部结构的重排. 其中C端区、N端区和活性区域(10 ~20)内氨基酸残基的柔 性增加,蛋白整体构象展开,导致被包埋在内部的2个活性位点(Ser18,His48)暴露,并且它们之间的距离 缩短;而活性区域(37~47)内氨基酸残基的构象调整,导致区域结构紧凑,使2个活性位点间的距离改变. 关键词摇 海参溶菌酶;重组蛋白SjLys鄄C;抑菌活性;热处理;分子动力学模拟 中图分类号摇 O641;Q786摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A摇 摇 摇 摇 [1] 溶菌酶(Lysozyme,EC3.2.1.17)又称胞壁质酶(Muramidase),在自然界中分布极为广泛 . 它主 要通过水解细菌细胞壁肽聚糖中的N鄄乙酰胞壁酸和N鄄乙酰葡萄糖胺之间的茁鄄1,4糖苷键,破坏肽聚糖 [1,2] [2,3] 的支架,导致细胞裂解,从而起到杀菌的作用 . 研究 发现,高等动物组织及分泌物、原生动物、 [4,5] 昆虫和微生物中都存在溶菌酶. 其中,卵清溶菌酶是发现最早、研究最多的溶细菌酶 ,广泛应用于 食品和医药等行业,但其有限的抗菌谱限制了进一步应用. 近期研究[5~9]发现,水产动物溶菌酶(i型 溶菌酶)与卵清溶菌酶(c型溶菌酶)不同,除了具有卵清溶菌酶的优点外,还有更为广泛的抗菌谱,不 仅能裂解革兰氏阳性菌,也能裂解革兰氏阴性菌. [9,10] Cong等 发现海参溶菌酶具有广谱抗菌活性,尤其对通常引起水产动物严重病害的病原菌弧菌 和假单胞菌具有明显的抗菌效果,所以重组海参溶菌酶将会在水生动物的病害防治中替代抗生素类药 物在绿色水产养殖中得到广泛关注. 通过对海参溶菌酶基因结构的分析发现,海参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme)的C端多肽(SjLys鄄C,成熟肽中的49 ~125 位氨基酸残基)可能编码了异构肽酶活 [9] 3 性 . 重组蛋白SjLys鄄C截断片段由76个氨基酸残基组成,分子量约为8.59伊10 ,分子内有二硫键交 [9]