细胞培养室.pdf

細胞培養室 Cell Culture Room 一、簡介： 細胞培養室內主要之配備有無菌層流操作台及恆溫二氧化碳培養箱。為能即時觀 察培養之細胞，室內亦備有一觀察用之倒立顯微鏡。此顯微鏡亦裝有相位差環 （Phase-contract ring ）及照相裝置，可供簡單及初步實驗資料之照相紀錄之用。 培養室內的其他附屬設備包括懸臂式離心機、二氧化碳鋼瓶、液態氮桶及水浴 槽，供細胞培養之必要處理手續使用。 二、使用原則及注意事項： 1. 此培養室僅限動物細胞培養使用，非動物細胞之樣品，切勿帶入此室。 2. 使用前需申請登記，非經核準前，除非緊急原因不可自行進入培養室。 3. 細胞房需經滅菌之物品請以專用之滅菌器滅菌。 4. 使用前需自行準備足夠量之秏材（包括手套、pipette 、tips 、拭紙、容器、 離心管及培養基）等，若為長期使用者請以實驗室為單位自備秏材架， 並將秏材置於架上。 5. 自用之藥品、塑膠與玻璃容器等需以油性筆標記持有者姓名及日期，可 放置於公用之冰箱及培養箱內。 6. 進入細胞房前需脫鞋置於門外，並於緩衝區內更換室內拖鞋及實驗衣， 原則上空調將維持於送風狀態，若溫度過高可降低溫度。 7. 使用細胞房內各儀器需先受訓並閱讀注意事項，使用後詳填記錄本上之 資料並簽名。 8. 牆上之殺菌燈需確定室內無人後才可開啟，每次殺菌時間以 15 分鐘為 限，原則上一天至多開啟二次（除非污染）。 三、儀器操作及注意事項 1.無菌操作台（Laminar-Flow Hood ）： 1.1 使用前請先開啟殺菌燈及抽氣開關，至少抽氣 5 分鐘以上，並 於操作前以70%酒精噴灑桌面並擦拭乾淨。 1.2 操作台內皆使用無菌容器，非無菌用品請勿攜入，容器置入前 請先以酒精擦拭瓶口。 1.3 微量注射器（ pipette ）及電動吸取器等僅限於培養室內使用，請 勿攜出，為避免操作儀器老化，使用後請移出操作台，勿長時 間置於 UV燈下。 1.4 操作台用畢後請將桌面清理乾淨並將秏材攜出，以酒精噴灑擦 乾後開啟殺菌燈。 2.培養箱（CO2 incubator : ThermoForma ）： 2.1開啟培養箱前請以酒精噴灑雙手消毒，非必要時請勿反覆及長 時間開啟培養箱。 2.2 注意培養箱之溫度（37 °C ）及氣體濃度（5% CO2 ）是否正常， 水盤內是否仍有水，並需經常以無菌水更換。 2.3容器置入前請先檢查是否預留空氣流通之空間，取出後請記得 鎖緊瓶口。 3.倒立式顯微鏡 （Inverted microscope: IX 70 + PM 20, Olympus ）： 3.1 正常操作下請勿任意轉動各微調裝置。 3.2使用螢光之前請先暖機 5 分鐘以上，並於記錄本上記錄使用時 間。 3.3使用照像裝置時請自備底片，若需將數位相機之記憶卡攜出時 請先登記並儘速歸還。 4. 桌上型懸臂式離心機（ Allegra 6R, Beckman ）： 4.1最大轉速為 4730 rpm 、4560 xg ，操作溫度為-5 °~25 °C ，使用前 務必先平衡，容許誤差範圍為±1 g內。 4.2使用後需打開蓋子使其乾燥，打開時請先確定其為完全靜止。 4.3 勿使用含有放射性、易燃、爆炸、致突變物質之溶液。 4.4請自備離心管，可使用 15 mL及 50 mL 兩型之管子。 4.5若液體溢出管外須立即清洗。 5. 水浴槽（ WB211, TKS ）： 5.1 水浴槽需定期更換無菌水，並注意水量是否足夠。 5.2 使用時記