生化实验肝糖原提取、鉴定与定量实验流程.doc

肝糖原提取、鉴定实验流程 吸取1ml量溶液时使用可调微量移液器，吸取1ml以上量溶液时使用刻度吸量管。鸡肝约1 g，剪碎 ＋5%CCl3COOH 1 ml 研磨至乳状 ＋5%CCl3COOH 3 ml 研磨成肝匀浆 全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min） 沉淀（弃去） 上清（取 ml） ＋ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟 离心5分钟（4000 r / min） 上清（弃去） 沉淀 ＋蒸镏水1 ml 沸水浴2分钟，溶解沉淀 白瓷板孔穴中 糖原溶液1ml ＋浓HCl 5滴 加碘试剂2滴 加碘试剂2滴 沸水浴15分钟，冷却 糖原溶液2滴 ＋50%NaOH 5滴 呈色对比 糖原水解液2滴 糖原水解液 ＋班氏试剂4滴 混匀 沸水浴2分钟，观察变化 实验流程鸡肝0.15 g ＋30%KOH 1.5ml （用吸量管） 沸水浴15分钟 冷却，全部转入100 ml容量瓶中 加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液 糖原的测定取3支试管，按下表操作。 试剂（ml） 空白管 标准管 样品管 蒸馏水 1.0 — — 标准葡萄糖溶液 — 1.0 — 糖原提取液 — — 1.0 0.2%蒽酮溶液 （用吸量管） 2.5 2.5 2.5 混匀，沸水浴10分钟，冷却c。在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。