怎样进行培养基灭菌.PDFVIP

怎样进行培养基灭菌 在发酵过程中，培养基灭菌主要有以下几个原因：如不灭菌，会使生物反应 的基质或产物，因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降;杂菌也会产生代谢 产物，这就使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降 ;杂菌大量繁 殖后，会改变反应液的 pH 值，使反应异常 ;有些杂菌会分解产物，使生产失败 ; 如果发生噬菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。怎样进行培养基灭菌? 湿热灭菌 培养基灭菌大多数用湿热灭菌。衡量热灭菌的指标很多，最常用的是 “热死 时间”，即在限定的温度下杀死原有微生物中一定比例所需的持续时间。影响热 灭菌的温度和时间的因素很多，包括：微生物种类、性质、浓度和培养基的性质、 浓度等。 (1)连续灭菌 连续灭菌也叫连消，其温度一般以 126～132 ℃为宜，总蒸汽压力要求达到 0.044～0.049 MPa 以上。培养基采用连续灭菌时，需在培养基进入发酵罐前， 直接用蒸汽进行空罐灭菌 (空消)，用无菌空气保压，待培养基流入罐后，开始冷 却。灭菌时对培养基的加热可采用各种加热器。培养基的冷却方式有喷淋冷却式、 真空冷却式、薄板换热器式几种方式，其过程均包括加热、维持和冷却。 (2)间歇灭菌 间歇灭菌即实消，是在每批培养基全部流入发酵罐后，就在罐内通入蒸汽加 热至灭菌温度，维持一定时间，再冷却到接种温度。实罐灭菌时，发酵罐与培养 基一起灭菌。 其他灭菌设备一般采用蒸汽灭菌，如设备十分耐压，则可采用较高的温度， 但必须注意设备内部的凹处及露出的小配管等蒸汽不能到达的部位。 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在制 备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在 24h 内完成灭菌工作。灭 菌时一般是在 0.105MPa 压力下，温度 121℃时，灭菌 15~30min 即可。消毒时间 不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会 在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。 将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的 2/3，用牛皮纸或 硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养 3d，若无污染现象，则证明灭菌是 彻底的，可以使用。暂时不用的培养基最好置于 10℃下保存。含 IAA 或 GA3 的 培养基应在 1 周内用完，其他培养基最多也不要超过 1 个月。 过滤灭菌 一些植物生长调节剂及有机物，如 IAA、GA3、ZT、CM 等，遇热容易分解， 不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过 滤器与滤膜 (孔径 0.45 微米)使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即 加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至 30℃时加入;若为固体培养 基，必须在培养基凝固之前 (50-60℃)加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。