色谱法(薄层色谱与柱色谱).ppt

《有机化学实验》 色谱法 （薄层色谱、柱色谱） 一. 实验目的 学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用； 掌握用薄层色谱和柱色谱分离和鉴定化合物的操作技术。 二. 实验原理和实验技术 色谱法：分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法之一。 色谱法基本原理：利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。 流动的体系称为流动相（气体或液体）；固定不动的物质称为固定相（可以是固体或液体＊）。 根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱等； 根据操作条件不同，可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱及高效液相色谱等类型。 二. 实验原理和实验技术 薄层色谱（TLC，薄层层析） 薄层吸附色谱的工作原理： 特点：所需样品少，分离时间短，效率高。 应用：精制样品，鉴定化合物，跟踪反应进程和柱色谱的摸索最佳条件等。 组　分 固定相 流动相 吸附剂 （固定相） 展开剂 （流动相） 样品点 （多组分） 吸附竞争 斑点的最高浓度中心至原点中心的距离 展开剂前沿至原点中心的距离 比移值Rf ： 比移值Rf 在一定条件下和溶质（组分）的分子结构、性能有关，不同的溶质在色谱分离过程的比移值是不同的。但对同一溶质在相同条件下进行色谱分离时，比移值是一个特定的常数（定性分析的依据）。 由于吸附剂（硅胶、氧化铝等，强极性）对样品中各组分吸附能力不同（极性强的组分被吸附能力越强），当展开剂（常常是具有一定极性的有机溶剂）流经吸附有样品的吸附剂时，展开剂与样品中的各组分对吸附剂产生竞争吸附，极性小的组分从吸附剂上解吸较易，随展开剂较快地移动；极性大的组分从吸附剂上解吸较难，随展开剂移动较慢。 二. 实验原理和实验技术 薄层色谱（TLC，薄层层析） 固定相的选择： 硅胶和氧化铝是薄层色谱常用的固定相，两者都属于极性吸附剂。 硅胶的型号：60G、600GF254、60H、60HF254和60HF254+366等 薄层吸附色谱（固定相为极性吸附剂）中，化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较强极性的化合物吸附较强，即Rf 值较小。 无机盐、离子型有机物 磺酸、羧酸 醇、酚、胺 醛、酮、酯 卤代烃、醚 芳香烃 烯 环烷烃 烷烃 常见有机化合物的极性大小： ＞ ＞ ＞ ＞ ＞ ＞ ＞ ＞ 　硅胶：（吸附性）表面的Si-OH基 （应用）分离酸性、中性有机物 氧化铝：（吸附性）铝原子上未成键的电子对 （应用）分离碱性、中性有机物 二. 实验原理和实验技术 薄层色谱（TLC，薄层层析） 展开剂的选择： 选择展开剂时，要考虑样品各组分的极性、溶解度和吸附活性等因素。 常用展开剂的极性大小顺序（仅对硅胶和氧化铝适用）： 一般情况下，溶剂的展开能力与溶剂的极性成正比。 溶剂的极性大 溶剂对化合物的解吸能力强 Rf 值大 己烷、石油醚 ＜ 环己烷 ＜ 四氯化碳 ＜ 三氯乙烯 ＜ 二硫化碳 ＜ 甲苯 ＜ 苯 ＜ 二氯甲烷 ＜ 氯仿 ＜ 乙醚 ＜ 四氢呋喃 ＜ 乙酸乙酯 ＜ 丙酮 ＜ 正丁醇 ＜ 丙醇 ＜ 乙醇 ＜ 甲醇 ＜水 ＜ 冰乙酸 ＜ 吡啶 ＜ 乙酸 如果单一展开剂分离效果不显著，可选用混合溶剂。 环己烷–乙酸乙酯混合溶剂 （９︰１） 二. 实验原理和实验技术 柱色谱 吸附柱色谱的工作原理： 在色谱柱中填入表面积很大、经过活化的多孔性粉状固体吸附剂（硅胶、氧化铝）。 分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。 当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂亲和力大小分别形成若干色带。 再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集。 二. 实验原理和实验技术 柱色谱 吸附剂的选择： 常用的吸附剂：氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。 吸附剂要求： 不能与被分离的物质和展开剂发生化学作用； 吸附剂的粒度大小要均匀。 粒度小，表面积大，吸附能力强，分离效果好，但流速慢； 粒度大，表面积小，吸附能力弱，分离效果差，但流速快。 氧化铝： 酸性（分离酸性物质，如有机酸类化合物） 中性（分离中性物质，如醛、酮、醌和酯类化合物） 碱性（分离碱性物质，如碳氢化合物、生物碱、胺等） 本实验吸附剂：中性氧化铝（150目） 二. 实验原理和实验技术 柱色谱 溶剂、洗脱剂的选择： 选择原则： 取决于样品各组分的极性； 极性小的组分用极性小的洗脱剂进行洗脱； 极性大的组分用极性大的洗脱剂△进行洗脱。 极性大的洗脱剂对极性大和小的组分洗脱能力都很强。 除单一溶剂外，也可采用混合溶剂， 或采用梯度（开始是低极性溶剂，后面是高极性溶剂） 最终选择： 根据各组