23 ssr分子标记在甜瓜图谱上的应用进展三、实验内容.pptVIP

甜瓜DUS测试标准品种SSR指纹图谱构建及应用 Author：张少慧 Supervisor:刘 莉 2013-9-27 一、甜瓜简介 三 四 一 二 二、研究背景及进展 三、实验内容 四、参考文献 一、甜瓜简介 甜瓜(Cucumis melo L.)是葫芦科(Cucurbita-ceae),黄瓜属甜瓜亚属的一种蔓生植物,在世界十大水果中仅次于葡萄、香蕉、柑橘、苹果。据统计,我国甜瓜的栽培面积和产量均居世界第1位,为广大城乡人民普遍喜爱的传统夏季鲜食水果。 甜瓜是葫芦科中变异性最为丰富的一个种，不仅在形态学上表现出极大的差异，在生长发育、呼吸跃变以及香气特征等生理生化性状上也表现出丰富的多样性，被称作“多态性种”（黄庆芝，2011）。 二、研究背景及进展 甜瓜品种多、乱、杂的状况严重影响了育种者的权益和甜瓜种业的健康发展，知识产权保护问题日益严峻。中国甜瓜在生产中普遍存在同名异物或同物异名现象，恶性事件不断，尽管近些年来随着中国种子企业素质的提高，低劣种子造成生产损失的事件在减少，但品种真实性的纠纷仍在增加。为解决甜瓜种子经营中的纠纷与市场混乱问题，有必要建立中国甜瓜品种的核酸指纹库，为品种真实性鉴定提供技术支撑。 2.1研究背景 DUS测试工作，即特异性（Distinctness）、一致性（Uniformity）和稳定性（Stability）测试，为品种鉴定提供了新的途径，愈来愈受到重视（张晗等，2011）。DUS测试根据其特异性、一致性和稳定性的试验结果,可以判定测试品种是否属于新品种,为植物新品种保护提供可靠的判定依据。李汝玉等（2001）认为, SSR标记是植物品种特异性鉴定的最好方法。吴渝生等（2003）、李晓辉等（2005）、王凤格等（2003）、赵久然等（2003）、张金渝等（2006）对玉米品种DNA指纹图谱的构建进行了大量研究,建立了用于品种鉴定的SSR标准体系并确定了绘制指纹图谱的SSR核心引物。陆光远等（2008）用SSR标记分析油菜品种的特异性和一致性,表明SSR标记是适合开展油菜品种DUS测试的鉴定技术。 2.1研究背景 传统的DUS测试主要以形态特征为基础，受环境影响大、稳定性差，测试周期长，其标准统一的品种描述和测试技术规程，在实际操作过程中较难执行，严重影响DUS测试的有效性和权威性（陈海荣等，2002）。由于形态DUS测试存在本身固有的缺陷,寻求快速、简便、准确的测试方法,使之成为形态DUS测试的有效辅助手段,是当前面临的重要研究课题。近年来,DNA分子标记技术发展迅速,已被广泛应用于甜瓜遗传多样性分析、遗传图谱构建、基因定位、杂交种鉴定等多个方面。 DNA分子标记技术应用于新品种DUS测试的优越性是显而易见的,如多态性高,较少的标记就可满足鉴定的需要;测试周期短,不受季节的限制,任何时候都可进行测试,可大大缩短时间;不受环境的影响等(Dolores Velez 等，2012)。 2.2 DUS测试研究进展 分子标记是继形态标记、细胞学标记、生化标记之后发展起来的新的一种遗传标记，反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段，直接反映了基因组DNA间的差异，有许多明显的优越性，表现为：(1)直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题；(2)数量极多，遍布整个基因组；(3)多态性高，自然界存在许多等位变异。无须人为创造；(4)表现为中性，不影响目标性状的表达；(5)许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体．根据其核心技术可将其分为三大类。第l类是以分子杂交(Southern杂交)为核心的标记技术，包括RFLP标记、DNA指纹技术、染色体原位杂交等；第2类是以聚合酶链式反应PCR技术为核心的标记技术，包括RAPD、SSR、ISSR、AFLP、STS、SCARs、AP—PCR、SRAP标记等；第3类是一些新型的分子标记，如SNP标记，EST等（许勇等，1999）。 2.2 DUS测试研究进展 目前，SSR（simple sequence repeats）技术被认为是植物新品种测试中较理想的标记技术，SSR即简单重复序列，又称微卫星DNA(Microsatellites)，是一种基于DNA长度多态性的分子标记技术。已经成功应用于油菜（陆光远等，2008）、水稻（程本义等，2008）、小麦（王立新等，2010）、玉米（张华生等，2011）、番茄（Cooke等，2003）等多种农作物的DUS测试。 2.2 DUS测试研究进展 SSR分子标记技术在甜瓜品种（系）鉴定及多样性的研究