邻苯二甲酸二丁酯酶联免疫分析方法的建立及镇江地区水体污.PDFVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第５期 — ２８９— 周　军，朱暖飞，邵启运，等．邻苯二甲酸二丁酯酶联免疫分析方法的建立及镇江地区水体污染调查研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（５）：２８９－２９２． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０５．０７５ 邻苯二甲酸二丁酯酶联免疫分析方法的建立 及镇江地区水体污染调查研究 周　军，朱暖飞，邵启运，黄梦璐，张　祯，吴向阳 （江苏大学环境与安全工程学院，江苏镇江２１２０００） 　　摘要：采用制备的邻苯二甲酸二丁酯多克隆抗体建立可检测环境水体中痕量邻苯二甲酸二丁酯（ＤＢＰ）的间接竞 争酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）分析方法，对各种参数进行优化后，在最优条件下本方法具有较高的灵敏度（检测限为 ６６．６ｎｇ／ｍＬ）、较宽的检测范围（７０～１６００ｎｇ／ｍＬ）、较好的准确度（回收率８２．８％～１０４．０％）。利用此高通量分析方 法对镇江部分河流中水样、底泥进行分析，结果发现镇江市区几处河流，ＤＢＰ普遍检出，水样中ＤＢＰ浓度为７６．５～ １４０．４ｎｇ／ｍＬ，底泥中ＤＢＰ浓度可达１１４．６～２４８．７ｎｇ／ｇ。 　　关键词：邻苯二甲酸二丁酯；酶联免疫；抗体；水体；镇江 　　中图分类号：Ｘ８２４　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０５－０２８９－０３ 　　邻苯二甲酸酯类物质（ｐｈｔｈａｌａｔｅｅｓｔｅｒｓ，ＰＡＥｓ）是一类大量 由于这类方法存在测试成本高、分析时间长、检测所需样品量 应用于塑料及一次性塑料消费品（食品包装材料、容器、医疗 大（通常大于５００ｍＬ）及前处理步骤繁琐等不足，无法在较大 用品）的增塑剂，还可以作为原料用于香味剂、化妆品和冷凝 范围内系统、全面、快速分析环境水体中ＤＢＰ的含量。与此 ［１］ 剂，这类化合物的使用，造成了全球性的污染 。其中，邻苯 相比，酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）具有灵敏度高、特异性强、操作简 二甲酸二丁酯（ｄｉｂｕｔｙｌｐｈｔｈａｌａｔｅ，ＤＢＰ）在被检出的ＰＡＥｓ样品 便、检测成本低、适合高通量分析的优势。因此，本研究利用 ［２］ 中分布最为广泛 ，Ｆａｔｏｋｉ等对南非ＥａｓｔＬｏｎｄｏｎ港中ＤＢＰ浓 自主制备的ＤＢＰ多克隆抗体，建立了高灵敏的ＥＬＩＳＡ方法， ［３］ 度进行了分析，其含量可达２．８～１２１．９ｎｇ／ｍＬ ；Ａｄｅｎｉｙｉ等 优化了影响方法灵敏度与准确度的各种因素，并以此方法对 报道称尼 日利亚 的河水 中 ＤＢＰ的含量 为 ２０２．５～ 镇江地区部分小型浅水河流中ＤＢＰ的污染状况进行了调查。 ［４］ ２７０．５ｎｇ／ｍＬ ；陆继龙等对第二松花江中下游中ＤＢＰ浓度 ［５］ １　材料和方法 进行了测定，其平均浓度高达７１７．２４ｎｇ／ｍＬ 。同时，研究 表明，ＤＢＰ具有明显的生殖毒性：可以引起染色体丢失或断 １．１　材料和试剂 ［６］ 裂等畸变，阻碍正常精子的生成 ；可导致雄性兔与大鼠生 ＤＢＰ抗原抗体，由江苏大学环境科学团队制备；邻苯二 ［７］ 殖道畸形，睾丸萎缩，从而造成其生殖系统损伤 。因此，建 甲酸二丁酯标准品、乙酸乙酯、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 立简单、快速高通量的分析方法，对水体中此类污染物进行分 ＩｇＧ、四甲基联胺，均购自美国Ｓｉｇｍａ公司；Ｔｗｅｅｎ－２０、十二水 析极其必要。ＤＢＰ分子的化学结构如图１所示。 合磷酸氢二钠