HPLC法测定黄芪中槲皮素及山奈酚含量.doc

HPLC法测定黄芪中槲皮素及山奈酚含量【摘要】目的：建立黄芪中槲皮素和山奈酚含量的测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法（HPLC）测定不同来源黄芪中槲皮素和山奈酚含量。结果：不同来源样品中2种黄酮苷元的定量分析结果分别为槲皮素平均回收率97.88％，RSD=1.07％；山奈酚平均回收率为99.83％，RSD=1.10％。结论：黄芪中含有槲皮素和山奈酚，其含量随产地而变化。 【关键词】高效液相色谱法；黄芪；槲皮素；山奈酚 文章编号：1009-5519（2007）17-2550-02 中图分类号：R28 文献标识码：A Determination of the contents of quercetin and kaempferol in astragalus membranaceus（fish.） bunge by HPLC DIAN Ling-hui，WU Tie，LU Ying-nian (Guangdong Medical College，Guangdong 523770，China) 【Abstract】Objective：To establish a HPLC method for the determination ofthe contents of quercetin and kaempferol in astragalus membranaceus（fish.）bunge.Methods：The determination of two kinds of flavonoid aglycones was performed by HPLC.Results：The average recovery of quercetin was 97.88%，RSD=1.07%．The average recovery of kaempferol was 99.83%，RSD=1.10%．Conclusion：There are quercetin and kaempferol in astragalus membranaceus（fish.）bunge，and their contents change with various origins． 【Key words】HPLC；Astragalus membranaceus（fish.）bunge；Quercetin；Kaempferol 黄芪为豆科植物黄芪[Astragalus membranaceus（Fish.）Bunge]和蒙古黄芪[Astragalus membranaceus（Fish.）Bunge var.mongholicus（Bge.）Hsiao]的干燥根，具有强心、抗自由基、促进蛋白质合成、护肝、增强机体的体液免疫和细胞免疫、抗衰老和抗辐射等作用[1]。槲皮素和山奈酚具有明显的降血压、降血脂、抗氧化剂等作用，现代药理研究发现槲皮素和山奈酚还具有抗肿瘤作用[2，3]。目前尚未见黄芪中槲皮素和山奈酚含量测定的报道，本实验采用反相高效液相色谱法（HPLC）同时测定黄芪中槲皮素和山奈酚的含量，该方法分离度高，重复性好，简便易行。 1 仪器与试药 岛津LC-10A型高效液相色谱仪(含在线脱气机)及紫外检测器。MET-TLER AE240全自动分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司)；三用恒温水浴锅(华北实验仪器有限公司)，SB-2200型超声波清洗机(上海必能信超声有限公司)；对照品：槲皮素（纯度98%），山奈酚(纯度98%天津药品生物制品检定所)，黄芪购于湛江市药材公司，甲醇（色谱纯），三次重蒸馏水，冰醋酸（分析纯），0.45μm微孔滤膜。 2 方法与结果 2.1 色谱条件：采用Hypersil ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流速0.8 ml/min，检测波长280 nm，柱温35 ℃，进样量5 μl，流动相为甲醇∶0.5%冰醋酸溶液（60∶40）。在此条件下，得到对照品及样品的色谱分离图(见图1)，黄芪样品中槲皮素和山奈酚色谱峰分别与其他成分分离良好。 2.2 对照品与供试品溶液的制备：精密称取槲皮素和山奈酚对照品适量，分别加甲醇制成0.183 mg/ml和0.124 mg/ml的对照品溶液。取不同来源黄芪各约1.00 g，分别加50 ml甲醇，精密称定，超声提取50分钟，补足甲醇，再精密称定，过滤，取续滤液经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。 2.3 线性关系考察：分别精密吸取槲皮素对照品溶液1、2、3、4、5 μl和山奈酚对照品溶液1、2、3、4、5 μl按上述色谱条件，测定峰面积。以色谱峰峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准