IgA肾病患者尿单核细胞趋化蛋白-1检测.doc

IgA肾病患者尿单核细胞趋化蛋白-1检测[摘要]目的：探讨IgA肾病患者尿液单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1，MCP-1)水平及其与临床指标和病理的关系。方法：采用酶联免疫吸附法对50例IgA肾病患者及38例健康人的尿液MCP-1水平进行检测，并与临床指标及肾脏病理进行多因素相关分析。结果：IgA肾病患者尿液MCP-1水平(123.47±18.56) pg/ml高于正常人(20.74±3.73) pg/ml。结论：IgA肾病患者尿MCP-1水平增高。 [关键词] 单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1)；IgA肾病；酶联免疫吸附法 [中图分类号] R692[文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）12（c）-187-02 MCP-1在肾小球疾病中的作用越来越受到重视，但MCP-1在IgA肾病中的作用研究相对较少，尤其IgA肾病患者尿液MCP-1水平与肾脏病理相关性如何，目前国内尚未见有报道，故我们用ELISA法对50例IgA肾病患者的尿液MCP-1进行定量检测，并与38例正常人对比，以探讨IgA肾病患者尿液MCP-1水平及其与肾功能、肾小管间质损害的关系，为防治IgA肾病、延缓肾功能衰竭提供理论依据。 1 材料与方法 1.1研究对象 IgA肾病组：入选病例50例，男25例，女25例，年龄15~64岁。全部病例均经肾活检，严格按照WHO标准确诊为IgA肾病，并排除了狼疮性肾炎、紫癜性肾炎等继发性IgA肾病，糖尿病、高血压病以及其他炎症性疾病；且所有IgA肾病患者均未用糖皮质激素及细胞毒药物等治疗。正常对照组：健康体检者，共38例，男18例，女20例，年龄22~63岁，尿检正常。 1.2主要试剂 人MCP-1 ELISA试剂盒，购自尚柏生物医学技术(北京)有限公司(试剂源于美国ADIALEXIS公司产品，批内变异±7.9%，批间变异±10.0%)。 1.3双抗体夹心ABC-ELISA法检测MCP-1 1.3.1试剂准备洗涤液：用重蒸水1:20稀释洗涤液。底物工作液配制：使用前将OPD片放入底物稀释液中溶解，每片加液5 ml。标准品液配制：使用前每管中加入蒸留水150 μl。 1.3.2建立标准曲线设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100 μl，第一孔加标准品100 μl，混匀后用加样器吸出100 μl，移至第2孔。如此反复作对倍稀释至第7孔，最后，从第七孔中吸出100 μl弃去，使之体积均为100 μl，第8孔为空白对照。待测品孔中每孔加入待测样品100ul。将反应板置37℃ 120 min。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤6次，向滤纸上印干。每孔中加入第一抗体工作液50 μl。将反应板充分混匀后置37℃ 60 min。每孔加酶标抗体工作液100 μl。将反应板置37℃ 60 min。洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤6次，向滤纸上印干。每孔加入底物工作液100 μl，置37℃暗处反应10 min。每孔加入终止液1滴混匀。在492 nm处测吸光值。结果计算与判断：所有OD值都减去空白值后再计算，以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以标准品500.0，250.0，125.0，62.5，32.0，16.0，8.0，0.0 pg/ml之OD值在半对数纸上作图，利用直线回归根据标准品的OD值计算出标准曲线公式，画出标准曲线，根据所得公式和标本OD值计算出相应MCP-1浓度。 1.4统计学方法 应用SPSS for window 12.0版的统计软件包作统计分析，以P＜0.05为有统计学意义。 2 结果 2.1 IgA肾病组与正常对照组尿液MCP-1水平的检测 IgA肾病患者与正常人尿液中均可检测出MCP-1水平，IgA肾病组尿液MCP-1浓度为（123.47±18.56）pg/ml，正常对照组为（20.74±3.73） pg/ml，经两样本t检验，t值为4.764，P=0.000，差异有统计学意义，IgA肾病患者的尿液MCP-1浓度较正常人增高，见表1与图1。 2.2 IgA肾病各肾小管间质损害组间及其与对照组尿液MCP-1水平比较 IgA肾病患者重度肾小管间质损害组及中度肾小管间质损害组尿液MCP-1水平均高于正常对照组、无病变组和轻度肾小管间质损害组，尤其以重度肾小管间质损害组增高明显;但正常对照组、无病变组及轻度肾小管间质损害组间尿液MCP-1水平比较无明显差异，见表2。 3 讨论 本实验显示IgA肾病患者尿液MCP-1水平高于正常人群。一般认为尿液MCP-1水平可反映肾局部表达和分泌MCP-1的能力，研究表明正常肾脏中肾小球血管内皮细胞、系膜细胞及