乙肝患者外周血单个核细胞内HBV DNA检测意义.doc

乙肝患者外周血单个核细胞内HBV DNA检测意义【摘要】目的：探讨HBV感染者外周血单个核细胞（PBMC）中HBV DNA的感染情况及临床意义。方法：采用荧光定量PCR技术对146例乙肝患者的外周血单个核细胞内及血清中的HBV DNA进行检测。结果：PBMC内HBV DNA的总检出率为54.8%（80/146），检出率随着病情加重而逐渐增高。血清中的HBV DNA检出率为47.3%(69/146)。结论：PBMC中HBV DNA较血清HBV DNA检测能更好反映肝细胞内HBV ＤＮＡ的存在情况，对乙肝患者HBV的复制状态有更准确的评价。 【关键词】乙肝病毒；外周血单个核细胞；聚合酶链反应 文章编号：1009-5519（2007）23-3575-01 中图分类号：R446 文献标识码：B PBMC主要为T细胞，也包括B、NK、K、单核细胞等免疫活性细胞，PBMC在机体的免疫反应中起重要作用。PBMC是HBV肝外的一个重要靶细胞，HBV不但存在在该细胞中，而且还能在其中复制和表现[1]。本研究对乙肝患者外周血单个核细胞进行HBV DNA检测。 1 资料和方法 1.1 标本来源：146例慢性HBV感染者均为2006~2007年本院住院患者，其中男94例，女52例，年龄20~60岁。诊断符合2000年全国第十次病毒性肝炎修订的诊断标准[2]。 1.2 外周血PBMC中HBV DNA测定：取患者外周血（肝素抗凝）5 ml，按常规盐析法提取单个核细胞（PBMC）基因组DNA，荧光定量PCR技术检测HBV DNA。为了排除血浆HBV DNA的干扰，在提取PBMC中总DNA时，将细胞洗涤3次以上，并对最后1次洗涤液进行HBV DNA检测，证实DNA阴性后再提取细胞DNA。 1.3 统计学处理：使用SPSS10.0统计软件进行χ2检验。 2 结果 PBMC中HBV DNA检出情况：146例乙肝患者PBMC内HBV DNA阳性率为54.8%(80/146)，组间HBV DNA阳性率随着肝细胞的损害程度加重而逐渐增高。结果见表1。血清中的HBV DNA检出率为47.3%(69/146)。11例患者PBMC HBV DNA阳性而血清HBV DNA阴性。 3 讨论 HBV ＤＮＡ除感染肝细胞外，还可存在PBMC中。HBV感染PBMC与感染肝细胞相似，由靶细胞上的HBV受体介导。临床上主要通过检测患者血清HBV DNA含量来反映患者体内HBV复制情况，很少检测PBMC的HBV DNA。 本次研究运用荧光定量PCR检测了乙肝患者PBMC中HBV DNA的水平，结果表明PBMC内HBV DNA阳性率54.8%。PBMC内HBV DNA的检出率与肝细胞的损害情况呈正相关。血清中的HBV DNA检出率为47.3%(69/146)。PBMC HBV DNA阳性而血清HBV DNA阴性的患者所占的比例逐渐上升。表明在这类患者经过长期慢性活动性肝炎阶段，病毒逐渐整合在肝细胞中，游离于血清中的病毒减少。乙型肝炎的慢性化可能是由于PBMC内HBV DNA持续存在，当血清中HBV被清除后，隐匿于PBMC中的HBV作为潜在的传染源，引起病毒重复感染和肝脏病变反复活动。HBV长期存在于PBMC中，增加HBV的整合机会。外周血淋巴细胞整合HBV DNA可能是肝病患者发生肝硬化及恶性转变的高危因素[3]。通过PBMC HBV DNA的检测能较准确地反映乙肝病毒在肝细胞内的状态和复制情况，从而对慢性乙型肝炎患者HBV的复制状态有更准确地评价。 参考文献： [1] 张凯宁，蔡艳俊，王 峰，等.乙肝患者外周血单个核细胞中乙肝病毒复制中间体RNA与乙肝病毒DNA相关性的研究[J].临床肝胆病杂志，2001，17（3）：149. [2] 中华医学会传染病与寄生虫病学分会，肝病学分会.病毒性肝炎防治方案[J].中华传染病杂志，2001，19：56. [3] Leung N，Tam J，Lav G，et al. Hepatitis B Virus DNA in peripheral blood leukocytes:a comparision between hepatocrllular carcinoma and other hepatitis B virus-related chronic liver disease[J].Cancer,1994,73:1143. 收稿日期：2007-08-13 注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。” 1