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低频电针对海洛因觅药行为及相关脑区FosB蛋白表达影响作者：刘惠芬　张富强　杨国栋　周文华 [摘要]目的：观察低频电针对海洛因觅药行为和FosB蛋白在相关脑区表达的影响，探讨电针作用机制。方法：用累进固定比率程序建立大鼠海洛因复吸模型，动物随机分3组：“三阴交”留针对照组、低频弱电针组和低频强电针组。用条件性线索和小剂量海洛因引燃诱导海洛因觅药行为；运用免疫组化技术观察FosB蛋白表达。结果：与治疗前比较，留针对照组和弱电针组均能减少海洛因戒断大鼠条件性线索诱导的觅药行为，弱电针组处理后小剂量海洛因引燃诱导的觅药行为也较对照组明显减少，同时，弱电针组处理后伏隔核、腹侧苍白球、基底外侧杏仁核等脑区FosB蛋白的表达明显减少。而强电针组对觅药行为虽有一定抑制作用，但无统计学意义，海洛因引燃后活动度较对照组和弱电针组增高。结论：低频电针低强度刺激能治疗海洛因觅药行为，这种作用可能与调节伏隔核、基底外侧杏仁核等脑区的神经适应有关。 [主题词]海洛因依赖／针灸疗法；电针；基因，FOS；基因表达 海洛因依赖是一种慢性复发性脑病，主要特征为反复难愈，解决海洛因复吸问题成为现戒毒研究工作的难点。针刺治疗对海洛因戒断症状有一定疗效。最近，发现不同频率电针治疗对吗啡诱导的位置偏爱有逆转作用，不同频率电针引起相关脑区脑啡肽、内啡肽的释放是电针治疗的机制之一。海洛因静脉自身给药以及伴药线索或海洛因引燃可以模拟人类复吸行为，是国际上公认的模型。电针对海洛因心理渴求和复吸的治疗尚没有文献报道。 从腹侧背盖区投射到伏隔核的中脑多巴胺系统是海洛因依赖的主要中枢部位，新近有文献报道基底外侧杏仁核参与了海洛因复吸过程。药物长期处理后可以引起细胞核内FosB蛋白表达增加，引起神经元的长时程的适应性改变，研究多集中于伏核，与停药后觅药行为的反复关系密切。 考虑到电流强度是电针治疗中的一个重要参数，本研究应用海洛因复吸模型观察不同强度的低频电针对海洛因觅药行为的影响。同时应用免疫组化技术观察相关成瘾脑区FosB蛋白的表达以及低频电针治疗对表达的影响。 1材料和方法 1．1 实验动物 雄性清洁级SD大鼠，体重230～250g，由浙江省实验动物中心提供。在正常温控光照与自由摄食饮水条件下饲养1w后进行实验。 1．2实验主要仪器、试剂和药品 (1)仪器：自身给药装置、G6805－D电针治疗仪(汕头市医用设备厂有限公司)、冰冻切片机(德国Leica公司)、奥林巴斯BX51显微镜(日本Olympus公司)。 (2)试剂和药品：多克隆FosB抗体(美国San―taCrBiotechnology公司)、SABC免疫组化染色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)、盐酸海洛因(纯度65R，购自公安部物证签定中心)。 1．3实验动物的准备和操作 (1)静脉插管手术：大鼠用戊巴比妥钠麻醉(50 mg／kg)，同时给予阿托品0．3 mg／kg，右颈外静脉进行插管。插管由3．5 cm硅胶管(外径0．94 mm，内径0．51 mm)和10 cmPE-20组成，PE-20部分通过背部穿出体外，外套堵头。术后连续3d给予0．3 mL青霉素(20万U)抗感染，后给予0．1 mL肝素钠溶液(50 U／mL)抗凝，单笼饲养，恢复7 d。 (2)海洛因静脉自身给药行为建立：把大鼠放入实验笼，连接输液系统，训练期间自由饮水，禁食。每天训练1次，每次4h或25针海洛因注射，单针注射剂量为0．05 mg／kg(浓度0．2 mg／mL)；强化程序为累进比率(PR5)强化程序，每一个给药周期开始，有效鼻触内绿灯亮(辨别刺激灯，提示反应可以获得海洛因注射)，鼻触反应条件(初始值为1次鼻触反应)满足后该绿灯熄灭，并给予一次海洛因注射，同时开启有效鼻触内红灯和笼灯5s，注射完毕进入不应期20s，期间仅记录反应，接着进入下一给药循环，每5次海洛因注射后，有效鼻触反应条件增加1。 当完成25针注射或4h后程序结束，把动物放回饲养笼，给予约20g饲料，饮水不限。连续训练14 d后进入消退阶段。测试环境线索1h条件性线索2h后，连续10d每天消退(即只给环境刺激而无海洛因注射)2h，后再测试环境1h及条件性刺激2h诱导的觅药行为。 (3)动物分组针刺方案及复吸测试：大鼠随机分为弱电针组、强电针组、对照组3组，每组6只。大鼠固定后参照全国针灸学会实验针灸研究会制定的《实验动物针灸穴位图谱》，取“三阴交”(SP6，后肢内踝尖直上10mm)，直刺5mm，刺人针灸针。弱电针组：电针频率选用2Hz(波宽0．6 ms)低频疏密波，通电至大鼠后肢微微抖动，以刚出现抖动为度；强电针组通电至大鼠后肢剧烈抖动，以大鼠最大耐受为度，刺激30 min，每日治疗1